蝶翼天使吡啶 乙酸铅
衍生化试剂：N,O-双三甲基硅基三氟乙酰胺（BSTFA）＋三甲基氯硅烷（TMCS）（99＋10)。
乙酸铅溶液（22 g/L） 三聚氰胺标准溶液 氩气 氦气
其他同3.2。 5.3 仪器和设备
气相色谱-质谱（GC-MS）仪
气相色谱-质谱/质谱（GC-MS/MS）仪：配有电子轰击电离离子源（EI）。 电子恒温箱。 其他同3.3。 5.4 样品处理 5.4.1 GC-MS法 5.4.1.1 提取 奶粉
称取5 g（精确至0.01 g）样品于50 mL具塞比色管，加入25 mL三氯乙酸溶液，涡漩振荡30 s，再加入15 mL三氯乙酸溶液，超声提取15 min，加入2 mL乙酸铅溶液，用三氯乙酸溶液定容至刻度。充分混匀后，转移上层提取液约30 mL至50 mL离心试管，以不低于4000 r/min离心10 min。上清液待净化。 5.4.1.2 净化
准确移取5 mL的待净化滤液至固相萃取柱中。再用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，弃淋洗液，抽近干后用3 mL氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，50℃下氮气吹干。
5.4.2 GC-MS/MS法 奶粉
称取0.5 g（精确至0.01 g）试样，加入 5 mL甲醇水溶液，涡 旋 混 匀2 min后，超声提取15 min ~20 min，以不低于4000 r/min离心10 min，取上清液200 μL用微孔滤膜过滤，50℃下氮气吹干。 5.4.3 衍生化
取上述氮气吹干残留物，加入600 μL的吡啶和200 μL衍生化试剂，混匀，70℃反应30 min 后，供GC-MS或GC-MS/MS法定量检测或确证。 5.5 气相色谱-质谱测定 5.5.1 标准曲线的绘制 5.5.1.1 GC-MS法
准确吸取三聚氰胺标准溶液0、0.4、0.8、1.6、4、8、16 mL 于 7 个 100 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。各取1 mL 用氮气吹干，按照5.4.3 步骤衍生化。配制成衍生产物浓度分别为0、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2 μg/mL 的标准溶液。反应液供 GC-MS 测定。以标准工作溶液浓度为横坐标，定量离子 质量色谱峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。标准溶液的 GC-MS 选择离子质量色谱图参见附录 A 中的图 A.3，三聚氰胺衍生物选择离子质谱图参见附录 A 中的图 A.4。
5.5.1.2 GC-MS/MS法
准确吸取三聚氰胺标准溶液0、0.04、0.08、0.4、0.8、4、8 mL分别于7个100 mL容量瓶中 ，用甲醇稀释至刻度。各取1 mL用氮气吹干，按照5.4.3步骤衍生化。配制成衍生化产物浓度分别为0、0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1 μg/mL的标准溶液。反应液供GC-MS/MS测定。以标准工作溶液浓度为横坐标，定量离子质量色谱峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。标准溶液的GC-MS/MS多反应监测质量色谱图 参见附录A中的图A.5。
5.5.2 定量测定
待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应对净化液稀释，重新衍生化后再进样分析。 5.5.3 定性判定 5.5.3.1 GC-MS 法
以标准样品的保留时间和监测离子（m/z 99、171、327 和 342）定性，待测样品中 4 个离子（m/z 99、171、327 和 342）的丰度比与标准品的相同离子丰度比相差不大于 20%。 5.5.3.2 GC-MS/MS 法
以标准样品的保留时间以及多反应监测离子（m/z 342>327、342>171）定性，其他定性判定原则同 4.5.5。 5.5.4 结果计算同3.5.4。 5.6 空白实验
除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。 5.7 方法定量限
本方法中，气相色谱-质谱法（GC-MS法）的定量限为0.05 mg/kg，气相色谱-质谱/质谱法（GC-MS/MS 法）的定量限为0.005 mg/kg。 5.8 回收率
GC-MS法：在添加浓度0.05 mg/kg～2 mg/kg浓度范围内，回收率在70%～110%之间，相对标准偏差小于10%。 GC-MS/MS法：在添加浓度0.005 mg/kg～1 mg/kg浓度范围内，回收率在90%～105%之间，相对标准偏差小于10%。 5.9 允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。
6 表面活性剂增敏荷移反应紫外分光光度法测定三聚氰胺
6.1 原理
CTMAB 对三聚氰胺与四氯对苯醌( TCBQ) 荷移反应产物具有显著的紫外光谱增敏作用，反应产物的吸光度值与三聚氰胺的浓度之间具有良好的线性关系。据此建立了一种三聚氰胺的紫外光谱测定新方法。
三聚氰胺分子中-NH2上的氮原子有一对孤对电子，空间阻碍又小，是良好的电子供体，而 TCBQ 是一个很强的平面型 π 电子受体，因此，在乙腈溶液中 MEL 与 TCBQ 形成了 n-π 型荷移配合物。用摩尔比法测得配合物的组成为 1∶ 3，表明是一个三聚氰胺分子中通过三个-NH2上的氮原子与三个 TCBQ 分子进行荷移反应，形成了 n-π型荷移配合物( TCBQ)3MEL，结构稳定，新出现的309nm 吸收峰正是该荷移反应产物的特征吸收峰。其形成原理可表示如下:
当向该体系加入 CTMAB 后，MEL + TCBQ +CTMAB 溶液的特征吸收峰位不变，但峰高明显增强，反映出表面活性剂 CTMAB 对 MEL 与 TCBQ 的荷移反应具有增敏效应.
6.2仪器与试剂
UV-2550 型紫外分光光度计; PB-21 型精密酸度计。 奶粉；
三聚氰胺( sigma 试剂，＞ 99%) 溶液 四氯对苯醌( TCBQ)
乙醇溶液( 1.0 ×10-3mol / L) ;
十六烷基三甲基溴化铵( CTMAB) 溶液( 0.2g/L) ; Tris-HCl 缓冲溶液 pH = 7.55; Tween-20;
十二烷基苯磺酸钠(SDBS) ; 十二烷基硫酸钠(SDS) ; 乙腈。
三聚氰胺分子印迹聚合物固相萃取柱: 自制。 所用试剂均为分析纯。实验用水为二次蒸馏水。
6.3 实验方法
三聚氰胺分子印迹固相萃取柱的制备：
以三聚氰胺为模板分子，以α-甲基丙烯酸为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，以乙醇-水(5:1，V/V) 为溶剂，60℃ 聚合 24 h，制备三聚氰胺分子印迹聚合物。取适量聚合物粉末装入固相萃取空柱中，两端分别用滤膜垫片堵住，备用。
奶粉样品的制备：
参照国标法处理样品: 在离心管中分别准确移取 1 mL 或 1. 0g 牛奶样品，加入 5 mL1% 三 氯 乙 酸 ( pH = 3. 0 )和乙腈混合液（3: 1，V/V) ，超 声 10 min，振 荡 10 min，以8000r / min离心 10 min，转移合并上清液，将上清液减压蒸干，水溶，用0. 45μm微孔滤膜过滤得样液。
吸光度的测定：
于 10 mL 比色管中，依次加入一定量 MEL 工作液、TCBQ 溶液 1.8 mL、 CTMAB 溶液 0.5 mL 和 Tris-HCl 缓冲溶液1.2mL；再取一10ml比色管，依次加入一定量的奶粉样品、TCBQ 溶液 1.8 mL、CTMAB 溶液 0.5 mL 和 Tris-HCl 缓冲溶液1.2mL。所有比色管摇匀，用乙腈定容至5mL，于30℃水浴中反应40min后，取出冷却至室温，用1cm 吸收池，以试剂空白为参比，在309nm 处测其吸光度。
6.4 数据处理
用所得的吸光度值做线性回归方程，求出样品中的三聚氰胺含量。 6.5 共存物质的干扰
当三聚氰胺溶液浓度为 1.0×10－ 6mol/L，测定的相对误差在±5% 范围内时发现，牛奶中一些常见物质对三聚氰胺测定的最大允许倍数分别是:Mg2+( 200) K+
(200) 、Fe3 +(100) 、Ca2 +(50) 、Zn2 +(10) 、蔗 糖 ( 50) 、葡 萄 糖 ( 200) 、麦 芽 糖(200) 、维生素 C(100) 。 2.2.6 样品加标回收率
采用两种方法测定样液，均未检出三聚氰胺。对样品进行三个浓度水平的加标回收率测定，结果见表2.1。可见新建分光光度法测定三聚氰胺结果满意; 用两种方法进行样品预处理时，方法 2 的加标回收率优于方法 1，反映自制固相萃取柱预处理样品效果更好。
表2.1 方法 1 编号 加入量 测量值 回收率 RSD c / ( μmol / L) c / ( μmol / L) / % / % 1 0.4 0.474 118.5 1.9 2 0.8 0.705 88.1 2.1 3 1.6 1.416 88.5 1.5 方法 2 编号 加入量 测量值 c / ( μmol / L) c / ( μmol / L) 回收率 / % RSD / %
