番茄叶霉病菌异菌脲抗药性突变体的诱导与生物学性状(2)

2.2　抗异菌脲突变体的获得及其抗性水平

本实验条件下,C F223(B en S2D ie R)菌株在紫外灯下照射10、20和30s的孢子萌发抑制率分别为53.3%、74.2%和93.5%,照射50s时抑制率即达100%。以C F223(B en S2D ie R)为亲本菌株,通过紫外诱变共获得17株异菌脲抗性突变体,突变频率为4.5×10-7。低抗菌株(L R)、中抗菌株(M R)和高抗菌株(HR)分别占17.65%、70.59%和11.75%,抗性水平在8.2～77.2倍之间,平均为29.0倍(表2)。这些抗性突变体对腐霉利和乙烯菌核利也表现出抗性,说明这3种二甲酰亚胺类药剂之间存在着交互抗性。其中对腐霉利的抗性水平在8.3～79.8倍之间,平均为29.1倍;对乙烯菌核利的抗性水平在7.6～78.9倍之间,平均为28.6倍(表2)。

2.3　抗异菌脲突变体对其他药剂的敏感性

通过紫外诱变获得的17株抗异菌脲突变体对醚菌酯、灭锈胺、烯酰吗啉、百菌清、戊唑醇、嘧霉胺和82羟基喹啉铜7种药剂的敏感性与其亲本菌株之间均无显著性差异(表3),说明二甲酰亚胺类杀菌剂与供试其他类型的化合物之间不存在交互抗性关系。

2.4　抗异菌脲突变体的生物学性状

17株抗异菌脲突变体在生长、产孢、孢子萌发能力等方面与亲本菌株C F223(B en S2D ie R)均无显著性差异(表4),说明番茄叶霉病菌对异菌脲的抗性突变对上述重要的生物学性状没有明显的影响。其中15株抗异菌脲突变体的致病力与亲本菌株没有显著性差异,但是YR215和YR228两个突变体的致病力显著降低。笔者认为,这两个菌株的致病力降低可能是紫外诱变过程中产生的负作用,而不是由于对异菌脲产生抗性突变所致。因此,番茄叶霉病菌对异菌脲抗性突变对其致病力也可能没有显著影响。

2.5　抗异菌脲突变体对渗透胁迫的敏感性

与生长、产孢、孢子萌发及致病能力等不同的是,番茄叶霉病菌对异菌脲的抗性突变对其对渗透胁迫的敏感性有显著影响(表5),20、40、60和80m g/mL氯化钠对17株突变体生长的平均抑制率分别为48.8%、50.5%、55.5%和65.8%,而对亲本的抑制率则仅分别为35.2%、39.5%、44.8%和49.9%。其中YR215和YR225两株高水平抗性菌株对渗透胁迫的敏感性尤其明显,20、40、60和80m g/mL氯化钠对它们的平均抑制率分别为57.9%、61.4%、68.0%和78.7%。

3　讨论

番茄叶霉病菌对苯并咪唑类杀菌剂已产生了十分严重的抗性[2,3]。前期研究表明,浙江、江苏地区番茄叶霉病菌对这类药剂的抗性频率高达71.9%[3]。但目前我国登记用于防治番茄叶霉病的只有以甲基硫菌灵为代表的苯并咪唑类杀菌剂。本研究针对该病害抗药性治理研究基本为空白的现状,进行了可用于替代苯并咪唑类杀菌剂的化合物的室内筛选,发现二甲酰亚胺类杀菌剂对番茄叶霉病菌具有较高的活性,尤其是抑制菌丝生长的活性为供试化合物中最高。不同的甾醇脱甲基抑制剂(DM Is)类化合物对叶霉病菌的活性差异较大,本研究中戊唑醇、丙环唑、苯醚甲环唑、三唑酮抑制番茄叶霉病菌菌丝生长的EC

50

值分别为1.86、8.57、11.6和27.78m g/mL。祁之秋等也曾报道氟硅唑对番茄叶霉病菌菌丝生长有较高的抑制活性[7]。其中巴斯夫公司开发的新杀菌剂烟酰胺[8,9]的活性也不高。但是部分药剂防治番茄叶霉病的实际效果还有待在田间进一步验证。另外,叶霉病菌对上述各类药剂与苯并咪唑类杀菌剂和乙霉威之间无交互抗性,这是由药剂间不同的作用机制导致的[3～10]。笔者前期的研究

603农　药　学　学　报V ol.

10

表1　不同类型杀菌剂对番茄叶霉病菌的抑制活性

Tab le1　Inh ib ito ry activ ity of d iffe ren t k inds of fung ic ides against C ladosp o rium fu lvum

杀菌剂Fung icide 菌株

Isolates

EC50/(m g/mL)平均EC50值M ean EC50value/(m g/mL)

菌丝生长

M ycelial g row th

分生孢子萌发

C on id ial ger m ination

菌丝生长

M ycelial g row th

分生孢子萌发

C onid ial ger m ination

腐霉利C F2230.994.68

p rocym idone C F2180.201.360.602.99

C F2120.612.93

乙烯菌核利C F2231.056.05

vinclozolin C F2180.715.550.815.47

C F2120.664.82

异菌脲C F2231.005.23

i p rod ione C F2181.126.731.106.29

C F2121.176.91

戊唑醇C F2231.7518.77

tebuconazo le C F2181.4916.351.8618.37

C F2122.3419.99

百菌清C F2234.023.96

chlo ro thalon il C F2185.046.124.875.25

C F2125.555.67

嘧霉胺C F2235.2915.23

p yri m ethan il C F2184.6313.165.1915.14

C F2125.6517.02

醚菌酯C F2237.333.17

kresoxi m2m ethy l C F2186.532.976.572.79

C F2125.852.24

代森锰锌C F2233.854.12

m ancozeb C F21810.449.896.616.66

C F2125.555.97

82羟基喹啉铜C F2237.195.38

82hyd roxyqu ino line C F2188.775.908.346.17　copp er(Ⅱ)salt C F2129.067.24

丙环唑C F2239.8520.07

p rop iconazo le C F2187.8818.358.5719.36

C F2127.9719.65

苯醚甲环唑C F22312.1235.67

difenoconazo le C F2188.7826.1211.633.67

C F21213.9039.22

嘧菌酯C F22313.187.74

azoxystrobin C F21815.278.5214.318.38

C F21214.488.87

灭锈胺C F22313.064.55

m ep ronil C F21817.335.9516.785.55

C F21219.966.15

烯酰吗啉C F2237.0525.30

di m ethom o r p h C F21835.6397.0421.3663.14

C F21221.4067.07

烟酰胺C F22319.348.39

boscalid C F21820.188.3922.079.18

C F21226.7010.75

三唑酮C F22330.5360.17

triadi m efon C F21830.5361.1227.7853.52

C F21222.2539.27703

N o.3张传清等:

番茄叶霉病菌异菌脲抗药性突变体的诱导与生物学性状

表2　番茄叶霉病菌抗异菌脲突变体的抗性水平与交互抗药性

Tab le 2　R esistance level and cross 2resistance of ip rod ione 2resistan t m u tan ts of C.fu lvum

菌株

Iso lates 表型

Pheno type

异菌脲ip rod ione

腐霉利p rocym idone

乙烯菌核利vinclozolin

EC 50/(m g /mL )

抗性水平

R esistance factor

33

EC 50/(m g /mL )

抗性水平

R esistance facto r

EC 50/(m g /mL )

抗性水平

R esistance facto r

C F 223S 31.002

0.992

1.052

YR 27L R 8.678.78.548.68.938.5YR 220M R 30.0630.129.8730.231.2329.7YR 229M R 22.4922.521.5421.821.0820.1YR 25L R 9.439.49.659.79.899.4YR 204M R 18.5718.618.7618.926.1424.9YR 215HR 74.9074.975.1275.978.1378.9YR 205L R 8.168.28.248.37.997.6YR 21M R 36.9136.936.9837.438.1836.4YR 228M R 34.8834.933.7834.133.2931.7YR 224M R 17.9618.016.9017.119.0918.2YR 225HR 77.1777.278.9879.880.9677.1YR 223M R 19.6619.719.1319.321.1920.2YR 230M R 13.3013.314.2314.413.0212.4YR 222M R 38.4038.440.1340.537.3435.6YR 217M R 28.4728.527.0627.327.9026.6YR 211M R 36.6336.534.0934.333.1631.6YR 29

M R

16.35

16.4

16.18

16.3

18.96

18.1

　　注:

3

S 、L R 、M R 和HR 分别表示异菌脲敏感、抵抗、中抗和高抗,下同。33抗性水平(R esistance factor )=抗性突变体的EC 50值/亲本的

EC 50值。

N ote:

3

S 、L R 、M R 和HR m ean sensitive,low ly resistant,m oderately resistant,and h igh ly resistan t to ip rod ione .The fo llow ing is the sam e .

33

R esistance factor =EC 50value of th is resistan t m utant /EC 50value of its p aren t .

表3　番茄叶霉病菌抗异菌脲突变体对其他类型药剂的敏感性

Tab le 3　S ensitiv ity of i p rod ione 2resistan t m u tan ts of C.fu lvum to o the r k inds of fung icides

菌株

Iso lates

EC 50/(m g /mL )

醚菌酯

kresox i m 2

m ethy l

灭锈胺

m ep ronil

烯酰吗啉

d i m ethom o r p h

百菌清

ch lo ro thalon il

戊唑醇

tebuconazole

嘧霉胺

py ri m ethan il

82羟基喹啉铜82hydroxyqu ino 2

line copper (Ⅱ)

C F 2233.17a 4.55a 7.05a 4.02a 1.75a 5.29a 5.38a 3YR 273.02a 4.55a 7.26a 4.36a 1.60a 5.11a 5.09a YR 2203.19a 4.34a 7.01a 3.98a 1.54a 5.23a 5.89a YR 2293.26a 4.45a 6.89a 3.99a 1.99a 5.09a 5.43a YR 253.21a 4.59a 6.78a 3.89a 1.91a 5.00a 5.24a YR 2043.17a 4.63a 7.23a 3.87a 1.76a 5.78a 5.17a YR 2153.00a 4.42a 7.10a 4.32a 1.75a 5.20a 5.98a YR 2052.98a 4.47a 7.03a 4.23a 1.87a 5.22a 4.98a YR 213.21a 4.76a 7.32a 4.00a 1.59a 5.54a 4.82a YR 2283.35a 4.34a 6.78a 4.18a 1.53a 5.13a 5.09a YR 2243.17a 4.19a 6.66a 3

.88a 1.77a 5.11a 5.44a YR 2253.11a 4.68a 6.98a 4.32a 1.98a 5.00a 5.77a YR 2233.11a 4.53a 7.23a 4.13a 1.85a 5.47a 5.89a YR 2303.24a 4.54a 7.00a 3.78a 1.80a 5.34a 4.97a YR 2223.09a 4.78a 7.11a 3.98a 1.70a 5.21a 5.23a YR 2173.17a 4.33a 7.07a 4.12a 1.68a 5.19a 5.35a YR 2113.16a 4.29a 6.99a 4.19a 1.77a 5.67a 4.98a YR 29

3.22a

4.58a

6.69a

3.91a

1.75a

5.66a

5.28a

　　注:3同一列数据后相同的小写字母表示根据在D PS 软件上进行L SD 分析其在P =0.05水平上差异不显著,下同。

N ote:

3

V alues w ith the sam e letters in the sam e row are no t significan tly differen t at P =0.05level according to a least sign ificant difference

test in soft w are D PS.The follow ing is the sam e .

803农　药　学　学　报

V ol .10

表4　番茄叶霉病菌抗异菌脲突变体的菌丝生长、产孢、孢子萌发和致病能力

Tab le 4　M ycelial g row th,sp o ru lation,con id ial ger m ina tion and p a thogen ic ity of

i p rod ione 2resistan t m u tan ts of C.fu lvum

菌株

Iso lates 表型

Pheno typ e

菌丝生长

M ycelial g row th /cm

产孢

Sp orulation /(×106

)

分生孢子萌发

C onid ial ger m ination (%)

致病性

Pathogenicity /cm

C F 223S 6.0a 5.9a 95.3a 4.5a YR 27L R 6.3a 5.1a 94.2a 4.5a YR 220M R 6.2a 6.2a 97.2a 4.7a YR 229M R 6.5a 5.7a 93.2a 4.6a YR 25L R 6.0a 6.6a 99.8a 4.3a YR 204M R 6.0a 5.1a 98.1a 4.4a YR 215HR 6.0a 5.5a 92.3a 2.7b YR 205L R 6.0a 5.2a 95.1a 4.5a YR 21M R 5.7a 6.7a 95.0a 4.5a YR 228M R 5.6a 6.2a 96.3a 1.4b YR 224M R 5.6a 5.5a 97.1a 4.5a YR 225HR 6.0a 5.6a 93.2a 4.6a YR 223M R 6.0a 6.6a 95.0a 4.8a YR 230M R 6.0a 6.9a 98.9a 4.3a YR 222M R 5.8a 5.4a 99.0a 4.5a YR 217M R 5.9a 5.8a 94.8a 4.5a YR 211M R 6.5a 5.8a 94.2a 4.2a YR 29

M R

6.1a

6.0a

95.2a

4.8a

表5　番茄叶霉病菌抗异菌脲突变体对渗透胁迫的敏感性

Tab le 5　S ensitiv ity of ip rod ione 2resistan t m u tan ts of C.fu lvum to osm o tic stress

菌株

Isolates 表型

Pheno typ e

不同浓度氯化钠对菌丝生长的抑制率(%)

Inhibition rate (%)of m ycelial g row th by N aC l at the d ifferen t concentration

20m g /mL 40m g /mL 60m g /mL 80m g /mL C F 223S 35.2a 39.5a 44.8a 49.9a YR 27L R 40.2b 43.2b 47.2b 53.8b YR 220M R 48.6c 49.5c 53.3c 64.2c YR 229M R 49.6c 50.3c 55.2c 65.6c YR 25L R 41.2b 43.4b 47.8b 53.9b YR 204M R 48.6c 50.0c 54.7c 63.9c YR 215HR 56.9d 60.8d 67

.9d 78.3d YR 205L R 41.6b 44.1b 48.3b 54.7b YR 21M R 48.8c 50.8c 55.9c 67.4c YR 228M R 49.6c 50.0c 56.0c 66.8c YR 224M R 49.0c 50.1c 56.0c 68.3c YR 225HR 58.9d 61.9d 68.1d 79.0d YR 223M R 50.0c 51.0c 56.8c 69.3c YR 230M R 48.8c 49.9c 53.2c 64.0c YR 222M R 50.2c 51.4c 56.2c 67.0c YR 217M R 49.4c 51.3c 56.1c 68.3c YR 211M R 49.0c 50.7c 55.7c 66.7c YR 29