非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响(3)

ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓｓｐｅｃｉｅ

ｓ

Ｄ：ａｄｏｕｂｌｅｂｏｎｄｉｎｔｈｅｍａｉｎｃｈａｉｎ．Ｔ：ｔｈｅｍａｉｎｃｈａｉｎｉｓｓａｔｕ?ｒａｔｅｄ．Ｈ：ａｈｙｄｒｏｘｙｌｇｒｏｕｐｉｎｔｈｅｓｕｂｓｉｄｅｃｈａｉｎ．

２．２　制霉菌素对ＦＬ细胞鞘脂类代谢的影响

研究中常用的制霉菌素浓度是０．０５４和０．１０８

μｍｏｌ·Ｌ－１［１８］。本研究首先用制霉菌素０．０５４μｍｏｌ·Ｌ－１处理ＦＬ细胞３０ｍｉｎ后，用上述方法提取细胞脂

类，同样进行质谱分析。发现制霉菌素尽管没有诱导新的鞘磷脂分子产生，但在ｍ∶ｚ７５０～９００范围内８１２，８３４和８３６的强度都有所增强，表明制霉菌素可激活鞘磷脂的合成。同时还诱导了新的神经酰胺

分子的合成，在ｍ∶ｚ５００～７５０范围内，ｍ∶ｚ６１２，６６０，６７６和７２０等出现（图１）。

进一步用制霉菌素０．１０８μｍｏｌ·Ｌ－１

处理细胞

目的 研究脂类干扰剂非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响是否相同。 方法?┯τ没?质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析方法分析不同剂量非律平和制霉菌素对人FL细胞株鞘脂类代谢的影响。 结果 非律平和制霉菌素均可影响FL细胞鞘脂类代谢,但是非律平(0.2 和10 μm

中国药理学与毒理学杂志　　２００７年１０月；２１（５）

后，发现ＦＬ细胞鞘脂类的改变与０．０５４μｍｏｌ·Ｌ

－１处理的结果有相似性，但也存在差异（表１），即

０．１０８μｍｏｌ·Ｌ－１制霉菌素也可抑制鞘磷脂的水解，

并诱导新神经酰胺分子的合成。但其诱导神经酰胺

的合成作用与０．０５４μｍｏｌ·Ｌ－１相比更强一些，有两

种新分子ｍ∶ｚ５５２和６５８被诱导。

利用我们实验室已经建立的质谱数据库［１３］

，搜

索以上差异的质谱峰，可以推断部分分子可能的结

构图，如ｍ∶ｚ８１２的几种可能结构列于表２。

３　讨论

鞘脂类与胆固醇在细胞表面形成脂筏，作为蛋白质附着的平台。非律平和制霉菌素是常用来干扰细胞脂筏结构的化学试剂，但对于它们的作用机制还不是很了解。本研究结果表明制霉菌素与非律平对鞘脂代谢的影响明显不同（表１），如非律平和制霉菌素均诱导了ｍ∶ｚ６６０和７２０的出现，但非律平诱导了ｍ∶ｚ５３６，５８０，６２４和６６８的出现，制霉菌素诱导了ｍ∶ｚ６１２和６７６的出现，表明非律平与制霉菌素对于神经酰胺代谢的影响有很大区别。此外，非律平对鞘磷脂的代谢无明显影响，而制霉菌素却可影响鞘磷脂的代谢。同时本研究结果还表明，在目前研究中使用的非律平的不同剂量都可干扰鞘脂类的代谢，且无明显差别；但是高剂量制霉菌素的干扰效率较低剂量强，说明制霉菌素的作用可能存在剂量效应关系，但由于检测的剂量较少，还需进一步深入研究。

在神经酰胺的代谢通路中存在一条从头合成途径（ｄｅｎｏｖｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ），还有一条与鞘磷脂可逆的合成／水解途径，即神经酰胺通过鞘磷脂合成酶（

ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎｓｙｎｔｈａｓｅ）的作用可进一步合成为鞘磷脂，而鞘磷脂又可被鞘磷脂酶水解为神经酰胺（图２）。因此当鞘磷脂酶被激活时，鞘磷脂被水解减少，而神经酰胺量升高。本研究结果表明，非律平诱导了新的神经酰胺分子的产生。因此，非律平极有可能激活了神经酰胺的从头合成途径，导致新的神经酰胺分子的生成，而同时神经酰胺与鞘磷脂的合成和水解途径则不受影响，因而鞘磷脂类的代谢没有显著变化。制霉菌素也同样可能激活神经酰胺的从头合成途径，导致新神经酰胺分子的出现，但同时也可以通过激活神经酰胺向鞘磷脂的转化途径，

或抑制鞘磷脂向神经酰胺的水解而导致鞘磷脂分子

·４１９·

Ｆｉｇ２．　Ｐｒｏｐｏｓｅｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｆｏｒｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｉｌｉｐｉｎ

ａｎｄｎｙｓｔａｔｉｎｏｎｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．↑：ａｃｔｉ?

ｖａｔｉｏｎ；Ｔ：ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ；？：ｔｈｅｒｅｉｓａｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｙ．

的累积（图２）。根据非律平和制霉菌素作用后神经

酰胺和鞘磷脂的不同变化，可以根据鞘脂类代谢的

通路［６］，推测二者干扰其代谢的不同靶点，为进一

步深入研究提供信息，这是传统方法所无法做到的。　　此外，在肿瘤细胞中通过调节鞘脂类代谢，增加神经酰胺的水平已经成为一种治疗肿瘤的新方法，

有些药物已进入临床验证阶段［

４，２０－２１］

。本研究发现非律平和制霉菌素作用于细胞也可以引起细胞神经酰胺代谢的改变，那么这两种药物对肿瘤的生长是否有一定的作用，为认识非律平和制霉菌素的药物作用提供了新视角。

Ｗｅｎｋ［１２］

在２００５年发表文章提出脂类组学将

是未来研究发展的一个热门方向，本研究进一步体现了脂类组学技术在当前脂类研究中的重要性。通过此项技术，不同的神经酰胺、鞘磷脂分子可以被鉴定出来，并进行相对定量，而且每一个分子的可能结构还可以通过与数据库的对比得到解析，这都是传统的脂类研究技术所无法达到的。虽然本研究中采用的ＭＡＬＤＩ?ＴＯＦ方法在定量上有不足之处，但能满足在一次实验中鉴别出不同的鞘脂类分子并对这些鞘脂类分子进行相对含量比较的实验要求。随着脂类组学新技术如ＬＣ?ＭＳ／ＭＳ的不断发展，定量的问题将得到更好的解决，为今后鞘脂的研究提供更先进的研究手段。４　参考文献：

［１］　ＳｉｍｏｎｓＫ，ＩｋｏｎｅｎＥ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｒａｆｔｓｉｎｃｅｌｌｍｅｍｂｒａｎｅｓ

［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９７，３８７（６６３３）：５６９－５７２．

［２］　ＹａｎｇＪ，Ｄｕｅｒｋｓｅｎ?ＨｕｇｈｅｓＰＪ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆａｐ５３?ｉｎｄｅ?

ｐｅｎｄｅｎｔ，ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄ?ｍｅｄｉａｔｅｄｃｙｔｏｌｙｔｉｃｐａｔｈｗａｙｉｎｐ５３?ｎｅｇａｔｉｖｅｍｏｕｓｅｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｃｅｌｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＮ?ｍｅｔｈ?ｙｌ?Ｎ?ｎｉｔｒｏ?Ｎ?ｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００１，２７６（２９）：２７１２９－２７１３５．