3.3 发酵培养基的配制与灭菌:
发酵培养基配方表
按发酵培养基成分配比,配制培养基,并加淀粉酶液化后,(在白磁板上滴加稀碘液后在加入一定量的培养基液体,待其不变成紫色,这时液化完全)再加入CaCO3,冷却后调pH值7.0—7.2,分装,包装灭菌。
灭菌条件:在高压蒸汽灭菌锅内保持121℃,0.14Mpa下,20分钟即可。 3.4 发酵:
发酵液2.5升装入发酵罐,离座灭菌。接入电源,将已灭菌的发酵培养基通入无菌空气,调整好发酵罐的各类初始参数:温度为30℃、pH6.5、搅拌100r/min、泡沫和消泡剂(豆油)自动调节等。12小时后观察是否生长杂菌,再将无水乙醇倒入接种口的环槽内,点燃后,进行无菌接种操作,接种量一般为10%。通气量为1:0.5~1.0vvm,全程用消泡剂消泡,发酵过程通氨,当接种后发酵pH低于6.5时就可以开始通氨,通氨量的多少参考pH值。要求73小时前pH在6.3~6.6,72~120小时pH在6.2~6.4,120~140小时pH在6.0~6.2。土霉素的发酵周期约7天,每隔24小时测一次龟裂链霉菌的菌丝浓度,采用721分光光度计在620nm下测发酵液OD值,同时测定土霉素效价。在菌丝接近自溶期前放罐,得到土霉素发酵液。 3.5 测定前发酵样品预处理:
发酵瓶摇匀,将少量倒入小烧杯,测pH。用9mol/L的盐酸溶液酸化pH至

