中二个软1 3 3 免疫组织化学染色:石蜡切片置60?的烤箱5~6h 后,主要步骤如下:切片常规脱蜡至水,3%过氧化氢 甲醇室温下孵育10min,以阻断内源性过氧化物酶的活性,高压加热方法修复抗原,滴加一抗(NF B、IL 8工作浓度分别为1#150、1#100),4?过夜,滴加即用型M ax V ision试剂,室温15min,滴加链酶亲和素生物素复合体(SA BC),室温30m in,DA B显色,镜下控制反应时间,充分水洗,苏木素轻度复染,脱水、透明、封片。以P BS代替一抗作为阴性对照。
1 3 4 结果判断及统计学方法:由于N F BmR NA及其蛋白在激活情况下是位于核内的,故以胞核出现棕褐色颗粒为阳性表达。IL 8以细胞质出现棕黄色染色为阳性表达。以病理图像分析仪进行图像分析,测量阳性反应的细胞密度(即阳性反应细胞面积/测量框面积),所测数据以x s表示。采用SPSS13 0统计软件对数据进行处理,多组间比较用One Way AN O VA进行分析,方差齐采用L SD方法,方差不齐采用T amhane%s T2。两样本均数的比较用independent Sam ples T T est分析。相关分析采用非参数统计方法,计算Spearman相关系数。
2 结 果
2 1 各组大鼠胃组织NF BmR NA的表达
2 1 1 核移位分析:正常组和假手术组大鼠胃黏膜层上皮细胞胞质呈浅棕色或棕色,固有层间质细胞、黏膜肌层以下各层无明显染色,提示正常和假手术组N F BmRN A未被激活。而造模后第8天,模型组大鼠胃溃疡边缘黏膜固有层腺上皮细胞和间质细胞及肉芽组织炎症细胞胞核内见大量棕色颗粒,细胞质淡染或无染色,提示N F BmRN A明显从细胞质移位于细胞核。JW YY组颗粒状的胞核染色不及模型组。第16天,模型组再生黏膜上皮细胞即有细胞核染色又有细胞质染色,提示随着溃疡愈合,愈合溃疡再生黏膜部分NF BmR N A从细胞核移出细胞质,与此时P65具有失活和活化两种状态一致。JW YY组再生黏膜固有层上皮细胞细胞质染色为主,少量腺上皮细胞和间质细胞胞核染色。
2 1 2 N F BmRN A表达阳性反应的细胞密度:见表1。
表1 N F BmRN A在不同时间点胃组织的表达(x s)
组别n 阳性反应的细胞密度(%) 8d 16d
正常组60 41 0 170 49 0 18
假手术组60 54 0 15#0 52 0 13#
模型组85 92 0 61&2 42 0 51&?
JW YY组83 77 0 59&(1 69 0 11&*
注:与正常组比较,#P>0 05;与正常组、假手术组比较,&P<0 01;与模型组比较,(P<0 01,*P<
0 05;与同组8d比较,?P<0 01
2 2 各组大鼠胃组织NF B蛋白的表达
2 2 1 核移位分析:在正常和假手术组大鼠胃组织胃黏膜层上皮细胞细胞质呈均匀浅棕色染色,固有层间质细胞、黏膜肌层以下各层无明显染色。造模8d,模型组溃疡边缘黏膜固有层上皮细胞、间质及肉芽组织炎症细胞呈胞核染色,表明N F B蛋白已被活化,反映了炎症刺激激活后核移位的现象。造模16d,随着溃疡愈合,N F B蛋白从胞核移出细胞质,愈合溃疡胃组织既有细胞质染色,又有胞核染色;JW YY组在第8天、第16天两个不同时间点的核染色均不及模型组。
2 2 2 N F B蛋白表达阳性反应的细胞密度:见表2。
表2 N F B蛋白在不同时间点胃组织的表达(x s)组别n
