PCRÑùÆ·±àºÅµÄ±ê×¼²Ù×÷³ÌÐò
1£®Ä¿µÄ£º±£Ö¤±ê±¾±àºÅµÄΨһÐÔ£¬Ò²ÊÇ׼ȷ·¢·Å±¨¸æµÄ»ù´¡¡£
2£®ÊÊÓ÷¶Î§£ºÊ¹ÓúËËáÀ©ÔöÓ«¹â¼ì²âʵÑéÊÒËù¿ªÕ¹µÄ¼¸£¿ÖÖ¼ì²âÏîÄ¿£ºÁ÷¸Ð²¡¶¾¡¢ÊÖ×ã¿Ú²¡¶¾¡¢»ôÂÒ»¡¾ú
µÈ¡£
3£®¸ºÔðÈË£º ²Ù×÷ÈË£º 4£®Ï¸Ôò£º
4£®1 °´¼ì²âÀàÐÍ·ÖÀà±ê¼Ç
¸ù¾Ý¼ì²âÏîÄ¿µÄ²»Í¬£¬Ã¿ÖÖ¼ì²âÏîÄ¿¶ÔÓ¦±ê¼ÇÒ»ÖÖΨһµÄ´úºÅ¡£ÈçÁ÷¸Ð²¡¶¾±ê¼ÇΪ £¿£¬ÊÖ×ã¿Ú²¡¶¾±ê¼ÇΪ£¿¡£ 4£®2 °´±ê±¾½ÓÊÕ˳Ðò±àºÅ
ÔÚͬÖÖ¼ì²âÀàÐ͵ı걾ÖУ¬°´±ê±¾¼ì²â˳Ðò±àºÅ¡£ÈçµÚÒ»¸ö¼ì²âÁ÷¸Ð²¡¶¾µÄ±ê±¾±àΪ£¿001£¬µÚ¶þ¸ö¼ì²âÁ÷¸Ð²¡¶¾µÄ±ê±¾±àΪ£¿002£¬µÚÈý¸ö¼ì²â½áºËµÄÑéµ¥±àΪ£¿003µÈ¡£ 4£®3 ±àºÅ²½Öè
a. ¶Ô½ÓÊܵı걾£¬¸ù¾Ý±àºÅµÄ»ù±¾ÔÔò±àºÅ£¬Ã¿¸öÑù±¾¶ÔÓ¦Ò»¸öΨһµÄ±àºÅ£¨È磿£©¡£ b. ÔÚÑùÆ·Ëͼ쵥ºÍ¶ÔÓ¦µÄÑùÆ·¹ÜÉÏ×÷ºÃÏàͬµÄ±ê¼Ç¡£
c. ×öºÃ±ê±¾µÄ½ÓÊռǼ£¬Ã¿¸öÑù±¾µÄ¼Ç¼¶¼Ó¦°üÀ¨ÒÔÏÂÐÅÏ¢£º½ÓÊÕʱ¼ä¡¢Ëͼ쵥λ¡¢»¼ÕßÐÕÃû¡¢ÐÔ±ð¡¢
ÄêÁä¡¢±ê±¾Àà±ð¡¢±ê±¾×´Ì¬¡¢Ëͱ걾Õß¡¢½ÓÊÕÈË¡¢±ê±¾±àºÅµÈ¡£ d. ´¦ÀíºÃÑùÆ·¡¢µãÑùºó£¬½«·´Ó¦¹Ü·ÅÈëÀ©ÔöÒÇÉÏ¿ªÊ¼À©Ôö¡£
e. À©ÔöµÃµ½½á¹ûºó£¬ÏÈÔڵǼDZíÉÏÌîÈë½á¹û£¬×÷ºÃ¼Ç¼£¬ÔÙÒ»Ò»°ÑʵÑé½á¹ûÌîÈëÏàÓ¦±¨¸æµ¥¡£ f. ·¢·Å¼ìÑ鱨¸æµ¥¡£ 5. ±¾ÎÄÉæ¼°ÒÔÏÂͼ±í£º
PCR±ê±¾½ÓÊռǼ±í PCR½á¹ûµÇ¼Ç±í±í
PCR»ùÒòÀ©ÔöʵÑéÊÒµÄÒªÇó
1£®Ä¿µÄ£º¹æ¶¨ÔÚ¸÷ÇøÄÚËù½øÐеŤ×÷¼°Æä²Ù×÷¡£ 2£®ÊÊÓ÷¶Î§£ºËùÓÐÔÚ±¾ÇøÄÚ½øÐеŤ×÷¡£ 3£®¸ºÔðÈË£º ²Ù×÷ÈË£º 4£®³ÌÐò£º
ʵÑéÊÒ·ÖËÄ£¿Çø:ÊÔ¼ÁÖü´æ¡¢×¼±¸Çø£»±ê±¾ÖƱ¸Çø£»À©ÔöÇø£»²úÎï·ÖÎöÇø¡£½øÈë¸÷ÇøÑϸñ°´ÕÕµ¥Ò»·½Ïò½øÐУ¬¼´ÊÔ¼ÁÖü´æ¡¢×¼±¸Çø¡ª¡ª±ê±¾ÖƱ¸Çø¡ª¡ªÀ©ÔöÇø¡ª¡ª²úÎï·ÖÎöÇø¡£¸÷Çø¼°ÆäÉ豸¡¢ÎïÆ·±ØÐëÓÐÃ÷È·µÄ±ê¼Ç£¬ÑϽû»ìÓá£
½øÈëPCRʵÑéÊҵŤ×÷ÈËÔ±£¨º¬ÎÀÉúÔ±£©£¬¶¼±ØÐë×ñÊØÊµÑéÊҵĹæÔò£¬ÓÈÆäÑϸñ×ñÊØ½øÈëPCRʵÑéÊÒµÄΨһÁ÷Ïò¡£²»¿É½øÈëPCRÀ©ÔöºóÇø´òɨÎÀÉú£¬ÔÙ·µ»ØÀ©ÔöÇ°Çø¹¤×÷¡£·ÀÖ¹·Ç±¾ÊÒ¹¤×÷ÈËÔ±´®¸Ú£¬½øÈë±¾ÊÒ¡£ÓÈÆä²»µÃΪÕÒÈË£¬¶øÄæÏòÎóÈëPCRʵÑéÊÒ¡£ ×ÜÔò
£¨1£© PCRʵÑéÊÒ¹¤×÷ÈËÔ±Ó¦¾ß±¸Ò½Ñ§¼ìÑ顢΢ÉúÎï¼ìÑé»ù±¾ÖªÊ¶£¬²¢ÊܹýPCRʵÑé
µÄ»ù´¡ÖªÊ¶ºÍ¼¼ÄÜÅàѵ¡£
£¨2£© PCRʵÑéÊÒ·ÖÊÔ¼Á×¼±¸£¬Ñù±¾×¼±¸£¬PCRÀ©ÔöºÍ²úÎï·ÖÎöËĸöÊÒ£¬¸÷ÊÒµÄʵÑéÎï
Æ·£¨º¬¼ÓÑùÆ÷£¬ÊԹܼܣ¬ÎüÍ·£¬¼Ç¼ֽ£¬±ÊµÈ£©£¬²»µÃ»ìÓã¬ÐëÌùÉϱêÇ©ÓèÒÔÇø±ð¡£
£¨3£© ʵÑéÊÒ¼¼ÊõÈËÔ±±ØÐëÑϸñ°´ÕÕPCRʵÑéÊÒ²Ù×÷³ÌÐò½øÐУ¬°üÀ¨ÊµÑéÊÒ²ÁÏ´¡£Ì¨
ÃæÏû¶¾£¬ÀëÐĹܣ¬ÎüÍ·µÄÎÞ¾úÃð»î×¼±¸£¬ÒÇÆ÷ʹÓÃºÍ·ÏÆúÎï´¦ÀíµÈ¡£
£¨4£© ½øÈëʵÑéÊҵŤ×÷ÈËÔ±±ØÐë¸ü»»¸÷ÊÒ²»Í¬µÄ¹¤×÷·þ£¨º¬Ã±ºÍЬ£©£¬ÇÚ»»Ï´¹¤×÷·þ£¬
ÒÔ¼°×ñÊØÊµÑéÊÒµÄΨһÁ÷ÏòµÄ¹æ¶¨£¬ÑϽû·´ÏòÁ÷¶¯¡£
£¨5£© ½øÈëPCRʵÑéÊÒºóÇøµÄÎïÆ·²»Ðí´ø½øPCRʵÑéÊÒÇ°Çø¡£Ã¿ÌìʵÑ鿪ʼǰ£¬±ØÐë
Çå½àµØÃæºÍÏû¶¾ÊµÑéÊÒÇ°Çø¡£ÊµÑé½áÊøÓ¦×ÏÍâÏßÏû¶¾ÊµÑéÌ¨Ãæ¡£Ã¿Ììϰàǰ´¦ÀíºÃ·ÏÎӦ¹ØºÃË®¡¢µç¡¢ÃºÆøºÍÃÅ´°¡£
£¨6£© ¶¨ÆÚУ׼ºÍάÐÞPCRÒÇ¡¢Ã¸±êÒǼ°ÀëÐÄ»ú¡¢Ë®Ô¡ÏäµÈÒÇÆ÷É豸¡£ £¨7£© ʵÑéÊÒÄÚ²»µÃÒûʳ¡¢ÎüÑÌ¡£ 4.1±ê±¾½ÓÊÕÇø
a. ʵÑéÈËÔ±½øÈë¸ÃÇøÐë´©±¾Çø°×É«¹¤×÷·þ£¬½ÓÊձ걾Ðë´÷Ò»´ÎÐÔÊÖÌס£
b. ¼Ç¼ʵÑéÊҸɡ¢Êª¶È£¬µÇ¼Ç±ùÏäζȡ£Ê¹ÓôøÓб¾Çø±êʶµÄ¼Ç¼±¾¡¢Ö½ºÍ±Ê£¬Ã¿Ïî¼Ç¼£¬Êéд¹¤ÕûÏêϸ¡£
c. ¶ÔËͼìµÄ±ê±¾ÊµÐÐË«Ç©ÖÆ¶È£¬²¢×Ðϸ¼ì²éÊÇ·ñ·ûºÏ¼ì²âÒªÇ󣬶ÔÓв»·ûºÏÒªÇóµÄ±ê
±¾¼°Ê±Í¨ÖªÏà¹Ø¿ÆÊÒÖØÐ²ÉÑù£¬²¢×÷¼Ç¼£¬Ã¿·Ý±ê±¾Ðè¸ø³öΨһÐÔ±àºÅ¡£ d. ±¾ÇøËùÓÐ·ÏÆúÎï·ÖÀà×°ÈëÀ¬»ø´ü£¬·âºÃ£¬ÔÚÀ¬»ø¿ðÉÏÌ׺ÃеÄÀ¬»ø´ü£¬½«À¬»ø´ø³ö
ʵÑéÊÒ¡£
e. ÿ´ÎʵÑé½áÊøºó£¬Çå½àʵÑę́¼°µØÃæ´ò¿ª×ÏÍâµÆÏû¶¾30·ÖÖÓ¡£¼Ç¼×ÏÍâµÆÊ¹ÓÃÇé
¿ö¡£
4.2ÊÔ¼ÁÖü´æ¡¢×¼±¸Çø
a. ʹÓôøÓб¾Çø±êʶµÄ¼Ç¼±¾¡¢Ö½ºÍ±Ê£¬Ã¿Ïî¼Ç¼£¬Êéд¹¤ÕûÏêϸ¡£
b. ×¼±¸ºÃµÄÊÔ¼ÁËÍÈëÏÂÒ»Çø £¬»¹ÔʵÑéÌ¨Ãæ£¬½«±¾ÇøËùÓÐ·ÏÆúÎï·ÖÀà×°ÈëÀ¬»ø´ü£¬
·â¿Ú£¬ÔÚÀ¬»ø¿ðÉÏÌ׺ÃеÄÀ¬»ø´ü£¬½«±¾ÇøÀ¬»ø´ø³öʵÑéÊÒ¡£ c. °×É«¹¤×÷·þÁôÔÚ±¾Çø¡£
d. ±¾ÇøÎ¬³ÖÏà¶ÔÕýѹ״̬£¨¿ªÆô»º³åÇøµÄÅÅÆøÉÈ£©¡£ÊµÑé½áÊøºó£¬Çå½àʵÑę́¼°µØÃæ
´ò¿ª×ÏÍâµÆÏû¶¾30·ÖÖÓ¡£
4.3±ê±¾ÖƱ¸Çø
a. ʵÑéÈËÔ±½øÈë¸ÃÇøÐëÔÚ»º³åÇø¸ü»»×¨ÓÃÀ¶É«¹¤×÷·þ¼°ÍÏЬ¡£ÊµÑéÖÐÐëʹÓÃÒ»´ÎÐÔñ
×Ó£¬´÷ÊÖÌ×£¬ÊÖÌ×ÔÚʵÑé¹ý³ÌÖÐÒÉÓÐÎÛȾӦÁ¢¼´¸ü»»¡£
b. ½«´«Èë±¾ÇøµÄÊÔ¼Á·ÅÈë±ùÏäÀä¶³ÊÒÊÔ¼Á´æ·Å×¨ÇøÔÝ´æ¡£¼Ç¼ʵÑéÊҸɡ¢Êª¶È£¬µÇ¼Ç
±ùÏäζȡ£
c. ½«¼ì²âÍêµÄ±ê±¾ÃÜ·â±£´æÔÚ¶¾ÖÖ¼ä-70¡æ±ùÏäÖУ¬È»ºó¼Ç¼±ê±¾µÄ±£´æÇé¿ö¡£ d. ʹÓôøÓб¾Çø±êʶµÄ¼Ç¼±¾¡¢Ö½ºÍ±Ê£¬Ã¿Ïî¼Ç¼£¬Êéд¹¤ÕûÏêϸ¡£
e. °´ÊÔ¼ÁºÐ˵Ã÷Êé¶Ô±ê±¾½øÐд¦Àí£¬½«´¦ÀíºÃµÄ±ê±¾ÔÚÉúÎﰲȫ¹ñÄÚ¼ÓÑù£¬¼Ç¼±ê±¾
µÄ´¦Àí¹ý³Ì¡£
f. ½«¼ÓÑùºóµÄÊÔ¼Á´«ËÍÏÂÒ»Çø£¬»¹ÔʵÑéÌ¨Ãæ£¬¹Ø±ÕËùÓÐÒÇÆ÷£¬¼Ç¼ÒÇÆ÷ʹÓÃʱ¼äºÍ
ÔËÐÐ״̬¡£
g. ʹÓùýµÄÀëÐĹܡ¢ÎüͷʵÑé½áÊøºóÐë¸ßѹÏû¶¾ºó·½¶ªÈëÀ¬»ø´ü£¬ËùÓÐÑùÆ·Ó¦°´ÓÐÉú
ÎﴫȾÐÔΣÏÕÆ·¶Ô´ý¡£
h. ½«±¾ÇøËùÓÐ·ÏÆúÎï·ÖÀà×°ÈëÀ¬»ø´ü£¬·â¿Ú£¬ÔÚÀ¬»ø¿ðÉÏÌ׺ÃеÄÀ¬»ø´ü£¬½«À¬»ø´ø
³ö±¾Çø¡£
i. ½«À¶É«¹¤×÷·þÁôÔÚ±¾Çø¡£
j. ±¾ÇøÓ¦±ÜÃâ²»±ØÒªµÄ×ß¶¯£¬Í¬Ê±Î¬³ÖÏà¶ÔÕýѹ״̬£¬ÊµÑé½áÊøºó£¬Çå½à°²È«¹ñ¡¢Êµ
Ñę́¼°µØÃ棬´ò¿ª×ÏÍâµÆÏû¶¾30·ÖÖÓ¡£
4.4À©ÔöÇø
a. ʵÑéÈËÔ±½øÈë¸ÃÇøÐëÔÚ»º³åÇø¸ü»»×¨Óã¿É«¹¤×÷·þ¼°ÍÏЬ¡£ b. ¼Ç¼ʵÑéÊҸɡ¢Êª¶È£¬µÇ¼Ç±ùÏäζȡ£
c. ʹÓôøÓб¾Çø±êʶµÄ¼Ç¼±¾¡¢Ö½ºÍ±Ê£¬Ã¿Ïî¼Ç¼£¬Êéд¹¤ÕûÏêϸ¡£
d. ½«´«Èë±¾Çø¼ÓÑùºóµÄÊÔ¼ÁÉÏ»úÀ©Ôö¡£
e. RT-PCRÀ©ÔöÍê³Éºó£¬½«ÑùƷͨ¹ý´«µÝ´°´«ÈëÏÂÒ»Çø£»ÊµÊ±Ó«¹âPCRÀ©ÔöÍê³Éºó£¬
¼Ç¼¼ì²â½á¹û£¬¼°Ê±·¢·Å±¨¸æµ¥£»¼Ç¼ÒÇÆ÷ʹÓÃʱ¼äºÍÔËÐÐ״̬¡£
f. ½«±¾ÇøËùÓÐ·ÏÆúÎï·ÖÀà×°ÈëÀ¬»ø´ü£¬·â¿Ú£¬ÔÚÀ¬»ø¿ðÉÏÌ׺ÃеÄÀ¬»ø´ü£¬È»ºó½«À¬
»ø´ø³öʵÑéÊÒ¡£
g. ½«·ÛÉ«¹¤×÷·þÁôÔÚ±¾ÊÒÔÙÀ뿪ʵÑéÊÒ¡£ 4. 5²úÎï·ÖÎöÇø
a. ½«´«Èë±¾Çø¼ÓÑùºóµÄÊÔ¼ÁÉÏ»úÀ©Ôö
b. À©ÔöÍê³Éºó£¬¼Ç¼¼ì²â½á¹û£¬¼°Ê±·¢·Å±¨¸æµ¥£¬¼Ç¼ÒÇÆ÷ʹÓÃʱ¼äºÍÔËÐÐ״̬¡£ c. ½«±¾ÇøËùÓÐ·ÏÆúÎï·ÖÀà×°ÈëÀ¬»ø´ü£¬·â¿Ú£¬ÔÚÀ¬»ø¿ðÉÏÌ׺ÃеÄÀ¬»ø´ü£¬È»ºó½«À¬
´ø³öʵÑéÊÒ¡£
d. £¿¹¤×÷·þÁôÔÚ±¾ÊÒÔÙÀ뿪ʵÑéÊÒ
e. ÑϽû±¾ÇøÎïÆ·´øÖÁÆäËûÇø£¬ÊµÑé½áÊøºóÇå½à¸ÃÇø´ò¿ª×ÏÍâµÆÕÕÉ䣬×îºÃÕûÒ¹Ïû¶¾£¬
¼Ç¼×ÏÍâµÆÊ¹ÓÃÇé¿ö¡£
5. ±¾ÎÄÉæ¼°ÒÔϱí¸ñ
PCRʵÑéÊÒ»·¾³ÎÂʪ¶È¼Ç¼±í ±ùÏäζȵǼDZí ʵÑéÊÒÇå½àÏû¶¾¼Ç¼±í À¬ »ø ´¦ Àí ¼Ç Â¼ ±í ×ÏÍâÏû¶¾³µÏû¶¾¼Ç¼±í
PCR·ÏÆúÎïµÄ´¦Àí³ÌÐò
1£®Ä¿µÄ£º±£Ö¤ÊµÑéÊÒ¡¢ÊµÑéÈËÔ±ºÍÍⲿ»·¾³µÄ°²È«¡£
2£®ÊÊÓ÷¶Î§£ººËËáÀ©Ôö¼ì²âʵÑéÊÒ³£Óû¯Ñ§ÊÔ¼Á£¨NaOH¡¢EDTA¡¢ÒÒ´¼¡¢ÉúÀíÑÎË®µÈ£©¡¢ÊµÑé
ÊÒ·ÏÆúÎïµÄ´¦Àí£» 3£®¸ºÔðÈË£º ²Ù×÷ÈË£º 4£®Ï¸Ôò£º
4.1¿ÆÊÒÖ°ÔðÓ¦¶Ô±¾ÊÒ¹¤×÷ÈËÔ±½²Ã÷±¾³ÌÐòÔÚÔ¤·À½»²æ¡¢ÊµÑéÊÒÎÛȾ¼°Çжϴ«²¥Í¾¾¶ÖеÄÖØ
ÒªÐÔ£¬²¢ÒªÇóÑϸñÖ´ÐС£
4.2ʵÑéÊÒËùÓÐÀ¬»ø£¬×°ÈëרÓÃÎÛÎï´üÄÚ£¬¸÷Çø±¸ÓУºÉú»îÀ¬»ø´ü£¨ºÚÉ«£©¼°ÉúÎïÎÛȾÀ¬»ø
´ü£¨»ÆÉ«£©¡£Ê¹ÓùýµÄÒ»´ÎÐÔÏûºÄÆ·(ÈçÊԹܡ¢ÎüÍ·¡¢ÀëÐĹܡ¢µÈ)ÔÚʵÑé½áÊøºóÁ¢¼´¸ßѹÏû¶¾£¬ÔÙ·ÅÈë»ÆÉ«À¬»ø´üÄÚ£¬Ê¹ÓùýµÄÊÖÌס¢Ð¬Ì×µÈÖ±½Ó·ÅÈë»ÆÉ«À¬»ø´üÄÚÔÙ¼¯Öд¦Àí¡£
4.3 ¼ÐÈ¡±ê±¾µÄ¹¤¾ß£¬Èçǯ¡¢Ä÷¡¢Îü¹ÜµÈ£¬Óúó¾ùÓ¦Ïû¶¾Çå½à£¬½øÐÐ΢ÉúÎï¼ìÑéʱ£¬Ó¦ÖØÐÂ
Ãð¾ú£¬½ðÊô¹¤¾ß¿ÉÉÕׯÃð¾ú»òÏû¶¾Òº½þÅÝ£»²£Á§ÖÆÆ·¸ßѹÕôÆûÃð¾ú¡£
4.6 Ê¢±ê±¾µÄÈÝÆ÷£¬ÈôΪһ´ÎÐÔʹÓõÄÖ½ÖÊÈÝÆ÷¼°ÆäÍâÃæ°ü±»µÄ·ÏÖ½£¬ÓøßѹÕôÆûÃð¾úºó¼¯
Öд¦Àí£»¶Ô¿ÉÔÙ´ÎʹÓõIJ£Á§¡¢ËÜÁÏ»òÌ´ÉÈÝÆ÷£¬Öó·Ð15·ÖÖÓ»ò¼ÓÈë10%´ÎÂÈËáÄÆÈÜÒº½þÅÝ2¡«4Сʱ£¬Ïû¶¾ÒºÃ¿ÈÕ¸ü»»£¬Ïû¶¾ºóÓÃÏ´µÓ¼Á¼°Á÷ˮˢϴ£¬Á¤¸É£¬ÓÃѹÁ¦ÕôÆûÃð¾úºó±¸Óá£
4.7 ·ÏÆú±ê±¾¼°ÆäÈÝÆ÷×°Èë»ÆÉ«À¬»ø´üÄÚ£¬¸ßѹÕôÆûÃð¾úºó£¬½»ÎÛÎï´¦ÀíÖÐÐļ¯Öд¦Àí¡£ 4.8ÈÕ³£Éú»îÀ¬»øÈçֽмµÈ°´Ò»°ãÀ¬»ø´¦Àí¡£ 5. ±¾ÎÄÉæ¼°ÒÔϱí¸ñ
PCR·ÏÆú±ê±¾´¦Àí½»½Ó±í

