九夏南笙如果一群含量完全相等样本，用FCM来测量，理想的情况下，CV=0，用FCM测量曲线表示为图－十六－a，但是在整个系统检测中，会带入许多误差，其中样本含量本身的误差，样本在流进照射光的微量变化，再加上仪器本身的误差等，实际得到的曲线为图－十六－b。
图十六 a b
CV值越小则曲线分布越窄越集中，测量误差就越小，一般的FCM在最佳状态时CV值均<2%。CV值的计算除了采用以上的计算公式外,还可以用半高峰宽来计算，半高峰宽指在峰高一半的地方量得的峰宽，它与CV值有以下的关系：
CV=半高峰宽/μ×0.4236×100%
上述公式是建立在正态分布的条件下，而实际情况所得测量数据分布常常是非对称图形，故采用半高峰宽所计算得到的CV值要明显小于前统计公式得到的CV，在实际情况中应引起注意。
3、前向角散射光检测灵敏度
前向角散射光检测灵敏度是指能够检测到的最小颗粒大小，一般目前商品化的FCM可以测量到0.2-0.5um左右。
4、FCM分析速度
分析速度以每秒可分析的细胞数来表示，当细胞流过光束的速度超过FCM仪器响应速度时，细胞产生的荧光信号就会被丢失，这段时间称为仪器的死时间（Dead time）。死时间越短，我们就说这台仪器处理数据越快，一般可达到3000个/ 秒~6000个/ 秒左右,FACSCalibur的分析速度为10000个/ 秒，大型机已达到每秒几万个细胞。
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1流式细胞仪简介
BD F ACSCalibur 中文培训手册
5、FCM分选指标
分选指标主要包括：分选速度、分选纯度及分选收获率。
分选速度指每秒可提取所要细胞的个数，目前台式带分选的仪器只有BD公司生产的FACSCalibur 产品，它的分选速度为300个/ 秒，BD大型机的流式细胞仪最高分选速度可达每秒上万个细胞。
分选纯度指被分选出细胞所占的百分比，一般台式机和大型机的分选纯度均可达到99%左右。
分选收获率指被分出细胞与原来溶液中该细胞的百分比。通常情况下，分选纯度和收获率是互相矛盾的，纯度提高，收获率降低，反之亦然。这是由于样品在液流中并不是等距离一个接着一个有序地排着队，而是随机的，因此，一旦两个不同细胞挨得很近时，在强调纯度和收获率不同条件下，仪器会作出取或舍的决定，因此，选择不同模式要视具体实验要求而定。
1流式细胞仪简介11
BD F ACSCalibur 中文培训手册第二章 FACSCalibur 的日常操作
2.1 FACSCalibur系统
FACSCalibur系统是一个全自动流式细胞分析系统。在流式细胞仪上，细胞在液流系统的驱动下流经激光检测区，激光聚焦在细胞上，对细胞进行逐个分析。FACSCalibur可以用于常规科研检测、免疫分型和DNA细胞周期分析等。FACSCalibur可以安装分选系统，您可以通过FACSCalibur，在测定样本中找到感兴趣的细胞群，并加以分选。
FACSCalibur系统主机、计算机和软件等部分组成，FACSCalibur的许多功能都是由软件控制的。主机系统
主机开关：位于仪器右侧下部，用于打开或关闭FACSCalibur。
液流控制板：控制液流和样本流速。
（1） 液流控制键：有三种模式。
?PRIME——去除流动池中的气泡。流动池施以反向压力，将液流从流动池冲入废液筒，持续一定时间后，流动池自动充满鞘液。PRIME结束，仪器恢复STANDBY状态。
?RUN——此时上样管加压，使细胞悬液从进样针（SIP）进入流动池。
?STANDBY——此时鞘液流动停止，激光功率下降。这样可以节省鞘液，延长激光寿命。
?Hard STANDBY——仪器处于STANDBY状态时，所有液流阀门都关闭，只有连接样本管和外界空气的气路阀门打开的。另外，激光功率降低到STANDBY水平。
?Auto STANDBY——如果仪器处于RUN状态，而上样架上无样本管，此时仪器进入12
2FACSCalibur的日常操作
BD F ACSCalibur 中文培训手册AutoSTANDBY状态。12秒后，系统将流动室和废液筒之间的阀门关闭，鞘液流停止。同
时，激光输出功率降低到STANDBY水平。上样支架上放好上样管后，仪器恢复RUN状
态，关闭的阀门重新打开，激光功率恢复到正常运行水平。
?如果一起处于RUN状态，而样本支撑架位于左侧或右侧位置，则仪器自动进入
STANDBY状态，以免浪费鞘液（此时RUN指示灯由绿色变为橙红色）。
（2） 样本流速控制钮：有三种流速选择。
?LO——样本流经流动池的速度是12uL/min
?MED——样本流经流动池的速度是35uL/min
?HI——样本流经流动池的速度是60uL/min
鞘液抽屉：位于仪器左下，滑动抽屉内有鞘液筒、废液筒和鞘液过滤器。
（1） 鞘液筒：容积4升，位于抽屉左侧。装满鞘液筒，仪器可以运行大约3小时。筒上装有液面感应器，鞘液用完时，仪器软件上会有显示。鞘液筒盖上有金属环扣，保证鞘液筒密闭。
（2） 废液筒：容积4升，位于抽屉右侧。筒上装有液面感应器，鞘液用完时，仪器软件上会有显示。注意废液可能有潜在的生物传染性。
（3） 鞘液过滤器：0.22um过滤器，去除鞘液中的杂质，保证进入流动池的鞘液是干净的。
（4） 气路减压阀：沿箭头方向移动阀门开关，鞘液筒减压，气压恢复正常。在鞘液筒装鞘液时，需要减压。
（5） 空气过滤网：用于过滤冷却激光的空气。
上样管支架（SIP）：SIP是样本管的上样位置。它包括三个部分，一个是进样针（SIT），将样本吸入流动池，还有就是液滴存留系统（DCS）和支撑架（TSA）。
2FACSCalibur的日常操作 13
BD F ACSCalibur 中文培训手册
（1） 进样针（Sample Injection Tube）：是一根不锈钢管，将细胞从样本针中吸入流动池。进样管外有一套管，是液流保存系统。
（2） 样本支撑架（Tube Support Arm）：用于支撑样本管。支撑架有三个位置：位于样本管之下的中位、样本管左侧或右侧，主要功能是启动液滴存留系统真空泵。当支撑架位于左侧或
右侧位置时，真空泵启动，而支撑架位于中位时，真空泵关闭。
（3） 液滴存留系统（Droplet Containment System）：系统由真空泵和外管组成。当样本支撑架位于旁位，真空泵就会启动，将液体从外管吸入真空泵。当样本支撑架处于中位，真空泵停
止工作。上样时应注意迅速将样本支撑架置于中位，以避免过多样本被抽吸到废液筒内。
细胞收集站（分选功能选配件）：放置细胞收集管。
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2FACSCalibur的日常操作
