柒夏52暨南大学学报(医学版)2003年Hanks液洗2遍,最后将细胞悬浮在5mLRPMIl640培养液中,计数细胞,并将细胞密度调整为5 106/mL。将脾细胞1mL置试管内,依次加入体积分数为10%SRBC0 5mL,补体1mL(用SA液按1 10稀释)。另设不加细胞的对照管(以SA液代替)。置37 恒温水浴中保温30min后,冰浴终止反应。2000r/min离心10min。取上清液于721分光光度计波长413nm处,分别测定各管吸光度A值。采用单因素方差分析比较各试验组与对照组的差异。
(3)血清溶血素的测定(血凝法) 新鲜羊血用生理盐水洗涤3次,每次离心2000r/min10min。将压积SRBC用生理盐水配成体积分数为2%的细胞悬液,在实验第10、24d分别用SRBC免疫小鼠,每只鼠腹腔注射0 2mL进行免疫。免疫后4~5d后,摘除眼球取血于离心管内,放置约1h,将凝固血与管壁剥离,使血清充分析出,2000r/min离心10min,收集血清。用生理盐水将血清倍比稀释,将不同稀释度的血清分别置于微量血凝试验板内,每孔100 L,再加入100 L体积分数为0 5%的SRBC悬液,混匀,装入湿润的平盘内加盖,于37 恒温水浴箱孵育3h,观察血球凝集程度。采用单因素方差分析比较各试验组与对照组的差异。血清凝集程度一般分为5级(0~ )记录,按下式计算抗体积数。
抗体积数=(1S1+2S2+3S3 nSn)
式中1、2、3 n代表对倍稀释的指数,S代表凝集程度的级别,抗体积数越大,表示血清抗体越高。0级:红细胞全部下沉,集中在孔底部形成致密的圆点状,四周液体清皙;
级:红细胞大部分沉集在孔底成圆点状,四周有少量凝集的红细胞;
级:凝集的红细胞在孔底形成薄层,中心可以明显见到一个疏松的红点;
级:凝集的红细胞均匀地铺散在孔底成一薄层,中心隐约可见一个小红点;
级:凝集的红细胞均匀地铺散在孔底成一薄层,疑块有时成卷折状。
2 实验结果
灵芝多糖喂鼠后2周,高、中、低3个剂量组小鼠抗体生成细胞A值以及高剂量组小鼠血清溶血素(抗体积数)和对照组比较均有显著性差异(P<0 01;P<0 05);灵芝多糖喂鼠后4周,高、中、低3个剂量组小鼠抗体生成细胞A值以及小鼠血清溶血素(抗体积数)和对照组比较均无显著性差异(P>0 05)。见表1,2。
表1 灵芝多糖对小鼠抗体生成细胞的影响
组 别
对照组
高剂量组
中剂量组
低剂量组2周n/只20202020A0.36 0.130.44 0.101)0.56 0.062)0.66 0.132)n/只101010104周A0.49 0.0.53 0.0.52 0.0.44 0.17141706
x s
4周
抗体积数
22.92 12.72
30.35 13.911)
18.43 14.05
16.93 15.36n/只10101010抗体积数19.87 14.9724.92 19.1225.77 16.6526.37 16.32x s 1)与对照组比较,P<O 05;2)与对照组比较,P<0 01表2 灵芝多糖对小鼠血清抗SRBC抗体凝集效价的影响组 别对照组高剂量组中剂量组低剂量组
1)与对照组比较,P<O 052周n/只20202020
3 讨论
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