落地成画口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到。⑼取下接种器械，在火焰上消毒。⑽把培养材料放入培养瓶，盖上瓶口。⑾接种结束后，清理和关闭超净工作台。
13、体细胞胚与合子胚比较
1) 体细胞胚是离体培养的产物，是由愈伤组织或胚型细胞团的表面细胞起源的，起源于非合子细胞，所处的发育条件与合子胚很不相同；
2) 在自然界，不定胚早期分裂顺序与合子胚也不完全相同；
3) 发育过程与合子胚相似，也经历球形期、心形期、鱼雷期和子叶期阶段，球形期后的体细胞还呈现一种固定的极性；
4) 大多数体细胞胚起源于单细胞，体细胞胚发生的实质是细胞分化，生理隔离是体细胞胚发生的先决条件、生理隔离是相对的。
5) 与合子胚不同的是，在培养中形成的体细胞胚常常具有两个以上的子叶。
14、胚状体形成植株与不定芽形成植株的区别
不定芽型.特点：a、繁殖率高b、能保持遗传稳定性c、缩短繁殖周期 胚状体发生型.特点：a、数量多、速度快、繁殖系数高；b、遗传性稳定
15、褐化现象，玻璃化现象产生原因，如何采取措施预防其发生？
一、褐化：1）褐变的原因：褐变的发生与外植体组织中所含的酚类化合物多少和多酚氧化酶活性有直接关系。但酚类很不稳定，溢出过程中与多酚氧化酶接触，在多酚氧化酶的催化下迅速氧化成褐色的醌类物质和水，醌类又会在酪氨酸酶等的作用下，与外植体组织中的蛋白质发生聚合，进一步引起其他酶系统失活，从而导致组织代谢紊乱，生长停滞不前，最终衰老死亡。
2）影响褐变的因素：1、植物材料：①基因型②材料年龄③取材部位④取材时期⑤外植体大小及受伤害程度；2、培养条件：主要是光照与温度。温度过高或光照过强，均可使多酚氧化酶的活性提高，从而加速外植体的褐变；3、培养基：①培养基状态：液体培养基可以有效克服外植体褐变，液体培养基再加上滤纸桥，效果就更好②无机盐③植物生长调节物质④抗氧化剂⑤吸附剂⑥pH值；4、材料转瓶周期。
3）褐变的预防措施有哪些？⑴选择适宜的外植体 ⑵采用适宜的培养基和光温条件 ⑶在培养基中加活性炭、抗氧化剂和其他抑制剂 ⑷缩短转瓶周期
二、玻璃化：1）玻璃化的原因：细胞生长过程中的环境变化。试管苗为了适应变化了的环境而呈玻璃状。
2）产生玻璃化苗的因素主要有激素浓度、琼脂用量、温度、离子水平、光照时间、通风条件等。(一) 激素浓度：细胞分裂素浓度提高（或细胞分裂素与生长素比例高），易导致玻璃化苗的产生；(二)琼脂浓度：培养基中琼脂浓度低时玻璃化苗比例增加，水浸状严重，苗向上长，琼脂的浓度一定要适当；(三)温度：温度越低玻璃化苗的比例越高；(四)光照时间；(五) 通风条件：气体交换的好坏取决于生长量、瓶内空间、培养时间和瓶盖种类；(六)离子水平。
3）预防玻璃化的措施：（1）适当控制培养基中无机营养成分；⑵适当提高培养基中蔗糖和琼脂的浓度；⑶适当降低细胞分裂素和赤霉素的浓度；⑷增加自然光照，控制光照时间；⑸控制好温度；⑹改善培养器皿的气体交换状况；⑺在培养基中添加其它物质。
第五章 细胞培养
1、细胞的分离方法：①机械法：利用叶肉组织或愈伤组织排列疏松、细胞间接触较少的特点，将叶片轻轻研碎，经过滤和离心，收集和净化细胞。优点：a、细胞未受酶伤害b、有利于细胞的生理和生化研究c、无须质壁分离。
