loading9原理：
根据理论上任何长度超过9～10(49=262144)个碱基的核苷酸片段可代表一种转录产物的特异序列（转录本），因此，选择特定的限制性内切酶分离转录产物中这些代表基因特异性9～10个碱基的核苷酸序列并制成标签，将这些序列标签连接、克隆和测序，根据其占总标签数的比例即可分析其对应编码基因的表达频率。
9步骤:提取总RNA以与生物素相连的寡聚dT为引物，逆转录合成cDNA识别4bp碱基的锚定酶（AE）进行酶切分离与抗生物素微磁球相连的3 ′端cDNA3 ′端cDNA分两份分别与连接子1和连接子2连接标签酶（TE）切割含有9－14个碱基的标签DNA聚合酶(Klenow)补平标签1标签28标签1标签2连接酶连接双标签(ditag)根据连接子1和2的序列设计引物进行PCR扩增电泳回收目的条带锚定酶（AE）切掉接头串联入载体进行表达频率的分析