loading在测试样品的均匀性是不充分的或可能由于明显大粒径而影响残留物的提取，应使用适当的手段进行密集的粉碎。在室温条件下，如果肉和汁分离或农药降解不显着。在冷冻状态下粉碎的样品，不稳定的化学农药的损失明显减少，通常会导致更小的颗粒尺寸和更加均匀。粉碎前，用刀粗切割样品（如3厘米×3厘米）和放进冰箱（如-18 ℃过夜）以便于加工。处理也可以辅助，通过保持在温度0 ℃以下进行低温研磨改进（使用干冰或液氮）。特别是水果和蔬菜，相比于室温研磨，低温研磨使表皮坚韧的样品均质化（如番茄或葡萄）更有效。鉴于表皮经常有非系统性农药，低温研磨大大降低了子采样的变异。当在较低的温度下处理试验样品，应避免高湿度造成结露。残余的二氧化碳应该允许充分消散，二氧化碳的贡重量可以忽略不计。 5.1.5试验部分
单项测试部分，每个充分的分析都是从综合测试中提取出来。这些测试的部分应该立即进行分析。如果测试部分不能直接进行分析，这测试样品或测试部分应冻结到直至需要为止。如果测试部分是从冷冻保存后的试验样品中取出，测试样品应在取出测试部分前混合，以确保均匀性已经重新建立。
5.1.6干果和类似物品的均质化（含水量＜30%）
加入850g冷水（3.23）到500克冻干果制品，并使混合物均匀（可以加入干冰）。 5.2第一提取步骤 5.2.1称重
将一个具代表性的粉碎均匀的样品测试部分（ma）转移到50ml的离心管中（4.4）。在水果和蔬菜重10g±0,1 g的情况下（ma）加入到离心管。干果匀浆如5.1.6描述，称重13.5 g对应5 g样品（ma）。干燥的样品材料像谷物制品、蜂蜜等，称重均质部分5g±0.05 g（ma）。发酵产品和提取物丰富的香料称2g±0.03g（ma）。 5.2.2水的添加
水含量低于80%的样品应加入足够的冷水（3.23），使总水含量约10克。见表3特定的水含量和相应的测试部分水的添加量。 注意 来自5.1.6匀浆不需要添加水。 5.2.3溶剂和内标的添加
加入10ml乙腈和一定量的小体积的ISTD溶液(V的含有一个或几个化合物的示例性浓度（5.2.4提取
盖好管子和摇晃震荡1分钟。如果样品的粉碎程度不够或残留不容易从基质中提取，提取的时间可延长（例如使用机械振动筛振荡20分钟）或使用高速分散器（例如ULTRA-TURRAX）。分散原件浸入样品-乙腈混合物，进行约2至5分钟高速粉碎。在任何情况下都要确保目标农药无明显降解发生。当添加ISTD溶液后，没有必要冲洗分散元素。然而，它依然要在下一个样品使用前彻底清洗，以避免交叉污染。 要确保采用的分散原件可以通过离心管口（4.4）。
sampleISTD,如100 μl），这溶液是表1中给出
cISTD）。
样品应冷冻或在解冻过程时（除水含量＜20%的干样品）提取。如果样品是采用常温提取，应确保无明显的目标农药降解发生。 5.3第二萃取步骤和分液
将配好的缓冲盐混合物（3.12）加入到5.2的悬浮液中。封闭试管，立即用力振荡摇1分钟，在> 3 000克离心5 min
注意 当处理酸性高的样品，如柠檬，酸橙，红醋栗和覆盆子，使用如3.12说明添加了氢氧化钠的缓冲盐混合物。
在水的存在下，硫酸镁往往形成结块，迅速硬化。这可以避免，在加入盐混合物后，立即振荡离心管几秒钟。在盐添加到所有样品后，一整批可以同时进行1分钟提取。
具有酸性基团的农药（例如苯氧乙酸）与氨基吸附剂相互作用，如PSA(N-丙基乙二胺)。因此，如果这种农药在分析范围内，那它们的定性分析（最好通过LC-MS/MS ESI NEG）应在离心分离后，直接从原料提取进行，而不是前处理（5.4）。对于这一点，将等分试样原料提取物装入小瓶并用于LC-MS/ MS分析。酸性农药特定的LC-MS/MS条件见附录A。
5.4处理
5.4.1去除共萃取的脂肪，蜡，糖类（如谷类，柑橘类水果）
转移8毫升乙腈相（5.3）等分试样于离心管（4.5）中，在冰箱储藏一夜（对于面粉，2小时已经足够），就是脂肪和蜡凝固和沉淀的主要部分。在短暂离心（如有必要），根据5.4.2，还是冷的6毫升提取物被用于分散固相萃取柱。
注意 由于在乙腈的溶解度的缘故，冻结有助于清除一些额外的样品提取物，如糖。共同提取的脂肪和蜡，这可能会对气相色谱分析的耐用性产生负面影响，使用硅胶反相吸附剂（ODS，C18型）可有效地除去。为此，25mg十八烷基硅烷键合硅胶填料、25mgN-丙基乙二胺和150mg硫酸镁每毫升提取物被用于分散固相萃取步骤。农药和所提出的内部质量标准（见表1）不受这些处理的影响。 5.4.2用氨基吸附剂清理（用PSA分散SPE）
从5.3或5.4.1的6毫升乙腈相被转移到聚丙烯单次使用的离心管（4.5），已经含有150mg的PSA（3.14）和900mg的硫酸镁（3.6）。盖好管子，用力振摇30秒，离心（5分钟，>3000克）。立即隔离，并如5.4.4描述酸化提取物。
1毫升的提取物，150毫克和25毫克硫酸镁PSA是必要的。
注意 在开始提取一批样品的步骤前，用分散固相萃取吸附剂有助于负荷离心管。分样器（4.12）的使用大大利于这个步骤。
5.4.3用氨基酸混合吸附剂+ GCB清理（用PSA + GCB分散SPE）
对于类胡萝卜素含量高（如红甜椒，胡萝卜）和叶绿素含量高（例如菠菜，生菜，芝麻菜，羽衣甘蓝，藤叶，除卷心莴苣莴和莴苣心）的样品，用PSA和GCB结合分散固相萃取SPE。
从5.3转移等分6ml乙腈相到离心管（4.5），其中一部分已经包含有150mgPSA（3.14）和胡萝卜、生菜提取物900毫克的吸附混合物1（3.16），和红甜椒，菠菜，生菜或芝麻提取物900mg的吸附混合物2（3.17）。封闭管，用力振荡2分钟，离心（例如在5分钟 > 3 000克）。立即隔离，并如5.4.4描述酸化提取物。
1ml提取物25mgPSA，取决于样品，150mg吸附混合物1或2是必要的。
注意 在开始提取一批样品的步骤前，用分散固相萃取吸附剂有助于负荷离心管。分样器（4.12）的使用大大利于这个步骤。 5.4.4提取稳定性
从5.5.2或5.4.3转移等分5毫升的清理提取物到一个螺丝杯储存瓶（4.10），小心以避免在吸附剂颗粒被转移，并稍微加入50μl5%甲酸-乙腈溶液酸化（3.13）。将调节pH提取物加到到自动取样器小瓶，用于气体和液体色谱分析。必要时，可使用存储在冰箱里的剩余提取物。
对于1毫升提取物，10μL的甲酸溶液（3.13）是必要的。
5.5测定
注入5.4.4（在酸性农药的情况下，利用原提取物5.3）的样品提取物与标准溶液（3.22）进入GC或LC仪器。这可能涉及校准溶液包围样品提取物。
测量可以采用各种仪器，仪器参数和柱进行。一些仪器参数和柱在附录A中列出。这些条件已经提供满意的结果。
LC-MS/MS的合适的实验测量条件，见 CEN/TR 15641 [5]。适合的气相色谱-质谱联用测定的实验条件，指的是[ 3 ]。合适的GC-MS实验测定的条件，请参见[3]。尽管如此，在测量仪器上进行单独调试的化合物，通常提供更好的灵敏度。 5.6试验的干扰和回收
在不同的合适的水平下，制备试剂空白和进行加标回收试验。在分析物的保留时间，试剂空白的色谱图不应显示任何明显的干扰峰。 6 结果评价 6.1识别和量化
许多参数可以用来确定不同分析物在样品提取物中的身份。这包括：
1）问题中分析物的保留时间（RT）或，甚至更好，保留时间比对ISTD（RT（A）/ RT（ISTD））从相同的运行得到的峰
2）分析物的峰的形状；和
3）在MS或MS / MS检测的情况下，记录相对丰度（一般2SRM转换需要MS / MS和3 MS应用离子）。
在样品提取液中确定的分析物参数与校准溶液中的农药（S）得到的参数进行比较。应该需要更高程度确认被分析物的身份，额外的措施可能是必要的，如使用不同的色谱分离条件或额外评估m / z或SRM转换。更多关于所需确认标准的信息，是指在欧盟的质量控制指南SANCO/2007/3131文件[ 1 ]。表1列出了可以采用的ISTDs。更多的使用ISTD将提供一些备份信息。
使用标准溶液（3.22.1或3.22.2）检查线性和确定每个校准功能，如6.2中描述的活性物质。基质匹配标准的使用是优选的，然而，对于先估计食品中农药残留限量或显示他们缺少，可以使用纯溶剂的标准溶液（3.22.1）。如果初步实验表明，任何抑制或增强效果的经历不显着影响结果，可用于定量分析。作为一旦相关的残留浓度的检测（如涉嫌侵犯，MRL）
更精确使用基质匹配标准测定（3.22.2）或标准加入法（6.3）应使用。影响样品提取物相比，响应的目标分析物的响应
注1 影响样品提取物的目标分析物响应与在纯溶剂标准溶液的响应的目标分析物的响应矩阵的影响的对比
注2 校准范围应适当对应量化的残留浓度。因此，因此，有必要从校准的测量结果，构建多个标定图。
本标准规定使用内部标准进行量化和识别。然而，没有ISTD,它还是可以量化。没有ISTD，乙腈相的体积（5.3）假设是体积相同的乙腈加入到5.2.3的样品中（10毫升）。
当使用内部标准，重要的是要知道，在峰信号的任何变化将直接影响分析物浓度的计算。理想情况下，由于体积的不同，内标信号应该只有变化，因此提高测量精度。然而，也有其他非理想因素，也可能影响ISTD的信号，从而引入分析物定量分析的误差。在分区或清理时，ISTD的损失将导致被分析物浓度的高估。这样的损失因此应该是最小的。实验表明，ISTD物质的回收率很高，由于ISTD物质损失仍然是微不足道的，分析物结果产生误差是由其他来源错误。一个特定的ISTD物质的抑制信号，由于共洗脱基质成分，可能发生在LC-MS应用，也会导致分析物被高估，而相对增强的ISTD物质信号，由于矩阵的共同提取物存在，在气相色谱中，将导致低估分析物浓度。因此，应用于气相色谱的istds应该是化合物，几乎没有基质诱导增强现象的影响。在LC-MS应用矩阵的影响，将取决于提取物是否包含特定的化合物，将和ISTD物质共同洗脱而影响其电离过程。
在任何情况下，它始终是引进的质量控制措施，以确保由ISTD引入的任何误差仍然微不足道。质量控制措施可能包括备份istds和可以在分析过程中的其他阶段加入（例如，最后的提取物）的质量控制标准，和可能帮助识别任何非体积有关的ISTD信号变化。序列中的每个样品中峰的信号强度观测对质量控制是很有帮助的。一个重要的信号转变的发生，数量应不使用使用备份进行物质或物质。在后者的情况下，精确的液体输送和的标准溶液体积的平衡和样品提取物是强制性的。
6.2计算不加标残留浓度 使用的变量：
ISTD溶液的内标准浓度 校准混合物的农药浓度 校准混合物中内标浓度 最后提取物中的农药浓度 最后提取物的内标浓度 测试部分的质量
加到测试部分的ISTD体积 校准混合物中农药峰面积 校准混合物中ISTD峰面积 最终的提取的农药峰面积 最终的提取物的ISTD的峰面积