loading液为新亚甲蓝。
31.点彩红细胞是尚未完全成熟的红细胞在发育过程中受到损害，其胞质中残存变性RNA，染色后出现大小、形状不同的蓝色颗粒。经碱性亚甲基蓝染色后，颗粒呈蓝色颗粒；瑞氏染色后，颗粒呈蓝黑色。在油镜下计数点彩红细胞数百分率。参考值：＜0.03%。
32.临床意义 增高见于①中毒，如铅、汞、银、铋、硝基苯、苯胺等；②各类贫血：如溶血性贫血、巨幼细胞性贫血、恶性贫血、恶性肿瘤等。 操作方法 取新鲜血1滴制片，用甲醇固定3min，以50g/L碱性亚甲蓝液染色1～2min，然后在油镜下计数1000个红细胞中点彩红细胞数，最后计算点彩红细胞数百分率。
33.原理 红细胞沉降率（ESR，血沉）指离体抗凝血静置后，红细胞在单位时间内沉降的速度。分为缗钱状红细胞形成期、快速沉降期和细胞堆积期（缓慢沉积期）。 方法学评价 ①手工法：有魏氏法、潘氏法等。魏氏法为ICSH推荐方法。潘氏法与魏氏法相关性好、用血量少，适于儿童。②血沉仪法：仪器测量时间短、重复性好、不受环境温度影响。③血沉率（ZSR）：不受年龄、性别、贫血、试验条件的影响，但需特殊离心仪器。 34.影响红细胞缗钱状形成的主要因素 ①血浆蛋白质比例：小分子蛋白如清蛋白、卵磷脂等使血沉减缓，大分子蛋白如急性反应蛋白、免疫球蛋白、巨球蛋白、胆固醇、甘油三酯等使血沉加快。②红细胞数量和形状：数量增多则血沉减慢，直径越大血沉越快。③血沉管：血沉管倾斜，沉降率增加。④血样本抗凝剂：浓度增加、血液凝固。⑤温度：室温过高（＞25℃）血沉加快；室温过低（＜18℃）血沉减慢。
操作方法和注意事项 ①取109mmol/L枸橼酸钠0.4ml，加静脉血1.6ml，混匀，用血沉管吸入混匀全血，并直立于血沉架上，1h末准确读取红细胞下沉后的血浆段高度，即红细胞沉降率。②血沉管内径应标准（2.5mm）。③血沉架应避免直接光照、移动和振动
35.魏氏法 ①＜50岁：男性0～15mm/h，女性0～20mm/h。②≥50岁：男性0～20mm/h，女性0～30mm/h。③＞85岁：男性0～30mm/h，女性0～42mm/h。④儿童：0～10mm/h。 潘氏法 成人：男性0～10mm/h，女性0～12mm/h。
36.血沉增快 ①生理性：女性高于男性。老年人血沉增快。②病理性：见于各种炎症、组织损伤及坏死、恶性肿瘤、高球蛋白血症、贫血、高胆固醇血症。
血沉减慢 真性或相对性红细胞增多症、DIC消耗性低凝血期、继发性纤溶期、肝病、肿瘤、其他严重疾病因未产生急性反应蛋白等使血沉减慢。
37.粒细胞发育阶段分为：①分裂池：包括原粒、早幼粒和中幼粒细胞，具有分裂能力；②成熟池：包括晚幼粒和杆状核粒细胞，失去分裂能力；③贮备池：包括杆状核粒和分叶核粒，成熟粒细胞贮存于骨髓，当机体感染或应激时，可释放入循环血液；④循环池：成熟粒细胞有一半随血液而循环，白细胞计数值就是循环池的粒细胞数；⑤边缘池：进入外周血的另一半成熟粒细胞，粘附于微静脉血管壁，边缘池和循环池粒细胞保持动态平衡。
中性粒细胞具有趋化、变形、粘附、吞噬和杀菌功能。嗜酸性粒细胞对组胺、抗原抗体复合物、肥大细胞有趋化性，分泌组胺酶灭活组胺，限制过敏反应；参与对蠕虫的免疫。嗜碱性粒细胞对血清因子、细菌、补体和激肽释放酶等物质有趋化作用。
38.外周血中单核细胞，大部分粘附于血管壁，少数随血液循环，转变为幼吞噬细胞，再成熟为吞噬细胞。单核-巨噬细胞具有吞噬病原体功能、吞噬和清理功能、吞噬抗原传递免疫信息功能，还参与杀菌、免疫和抗肿瘤。
39.淋巴细胞是人体主要免疫活性细胞，约占白细胞总数的1/4。B淋巴细胞在骨髓、脾、淋巴结、其他淋巴组织生发中心发育成熟，占20%～30%，参与体液免疫；T淋巴细胞在胸腺、脾、淋巴结和其他淋巴组织，依赖胸腺素发育成熟，占60%～70%，参与细胞免疫。还有少数NK细胞（杀伤细胞）、N细胞（裸细胞）、D细胞（双标志细胞）。 40.原理 白细胞计数是测定单位体积血液中各种白细胞总数。①显微镜计数法：用白细胞计
数稀释液将血液稀释一定倍数，并破坏红细胞后，滴入血细胞计数盘，在显微镜下计数一定范围内白细胞数，经换算求得每升血液中各种白细胞总数。②血液分析仪计数法：电阻抗法、光散射法。 方法学评价：①显微镜计数法：简便易行，但重复性和准确性较差，受微量吸管、血细胞计数板、细胞分布、人为因素等多种情况影响。②血液分析仪计数法：计数细胞数量多、速度快、易于标准化、计数精确性较高。 41.经验控制 ①与红细胞数比较：正常情况下，红细胞数/白细胞数约为（500～1000）∶1。②与血涂片白细胞分布密度一致性。
计数误差 ①熟练不操作、仪器未经校准。②固有误差：计数室内每次血细胞分布不可能完全相同所致的误差，与计数细胞数量成反比。③有核红细胞不能被白细胞稀释液破坏，使白细胞计数值假性增高。
质量控制常规考核标准（RCS） 基于白细胞在计数池四大格的分布情况而定。若白细胞≤4×109/L，RCS应＜30%，白细胞4.1～14.9×109/L，RCS应＜20%，白细胞≥15×109/L，RCS应＜15%。超过上述标准应重新充池计数。 42.参考值 成人：（4～10）×109/L。新生儿：（15～20）×109/L。6个月～2岁：（11～12）×109/L。儿童：（5～12）×109/L。
临床意义 白细胞计数与中性粒细胞计数的临床意义基本相同。化脓性感染、急性失血、急性溶血可引起白细胞数增高，但病毒性感染一般不引起白细胞数增高。
43.显微镜计数法 白细胞稀释液0.38ml加血20ml，充分混匀后充入计数池，室温静置2～3min，在低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞的总数，最后计算每升血液中白细胞计数值，公式为：白细胞数= 4个大方格内WBC数N/4*10*20*10.6=N/20*10.9/L
44.白细胞分类计数（DC）是将血液制成涂片，染色后在油镜下进行分类，求得各种类型白细胞的比值（百分率）。方法：①显微镜分类法：耗时、精确性和重复性较差。②血液分析仪分类法：有三分群和五分类两法，速度快、准确性高、易于标准化、能提示异常结果、结果以数据、图形、文字等多种形式展示，是白细胞分类和筛检首选方法，但不能完全代替显微镜检查法对异常白细胞进行鉴别和分类。 影响分类计数准确性因素：（1）细胞分布不均；（2）形态识别差异：①杆状核和分叶核诊断标准差异；②单核细胞和大淋巴细胞鉴别能力差异；③染色较差的涂片，嗜碱性粒细胞和中性粒细胞难以区分。
45.中性杆状核粒细胞1～5 中性分叶核粒细胞50～70 嗜酸粒细胞0.5～5 嗜碱性细胞0～1 淋巴细胞20～40 单核细胞 3～8 46.中性粒细胞
（1）生理性增多：中性分叶核粒细胞＞70%，绝对值＞7×109/L。常见于①年龄变化；②日间变化；③运动、疼痛、情绪变化；④妊娠与分娩；⑤其他。
（2）反应性增多：是机体的应激反应，见于①急性感染或炎症；②广泛组织损伤或坏死；③急性溶血；④急性失血；⑤急性中毒；⑥恶性肿瘤等。
（3）异常增生性增多：白血病（如急性白血病、慢性白血病）、骨髓增殖性疾病（如真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、骨髓纤维化症）。
（4）中性粒细胞减低：①某些感染；②血液病；③慢性理化损伤；④自身免疫性疾病；⑤脾功能亢进。
（5）中性粒细胞核象变化：正常时，外周血中性粒细胞以3叶核居多，杆状核与分叶核比值为1∶13。①核左移：外周血中杆状核粒细胞增多或（和）出现晚幼粒、中幼粒、早幼粒等细胞称为核左移。见于感染（尤其急性化脓性感染）、急性中毒、急性溶血、急性失血等。②核右移：中性粒细胞核分叶5叶以上者＞3%称为核右移，常伴白细胞总数减低。见于营养性巨幼细胞性贫血、恶性贫血、应用抗代谢药物、炎症恢复期。
嗜碱性粒细胞 增多见于①过敏性或炎症性疾病；②骨髓增生性疾病；③嗜碱性粒细胞白血病。减少见于甲状腺功能亢进、妊娠、放疗、化疗、糖皮质激素治疗、感染急性期。
淋巴细胞 生理性增多见于儿童期淋巴细胞生理性增多。病理性增多见于急性传染病、肾移植术后（如发生排异反应）、白血病（如淋巴细胞性白血病、白血性淋巴肉瘤）、再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症。
单核细胞 （1）生理性增多：出生后2周婴儿可呈生理性单核细胞增多，可达15%或更多，妊娠时生理性增高与中性粒细胞变化相平行。（2）病理性增多：见于某些感染（如亚急性感染性心内膜炎、疟疾、黑热病等）、急性感染恢复期、活动性肺结核（如严重的浸润性和粟粒性结核）、某些血液病（如粒细胞缺乏症恢复期、恶性组织细胞病、淋巴瘤、单核细胞白血病、骨髓增生异常综合征）。
47.用嗜酸性粒细胞稀释液破坏红细胞和大部分白细胞，并将嗜酸性粒细胞着色，滴入细胞计数盘计数。参考值：成人（0.05～0.5）×109/L。方法学评价：①显微镜计数法：嗜酸性粒细胞绝对值比百分率更有临床价值。②血液分析仪法：提供嗜酸性粒细胞百分率、绝对值、直方图和散点图，是目前最有效的嗜酸性粒细胞筛检方法。
48.增多 成人外周血嗜酸性粒细胞＞0.5×109/L。见于①寄生虫病；②变态反应性疾病；③皮肤病；④血液病；⑤某些恶性肿瘤；⑥某些传染病；⑦其他疾病：风湿性疾病、脑垂体前叶功能减低症、肾上腺皮质功能减低症、过敏性间质性肾炎等；⑧高嗜酸性粒细胞综合征。减低 见于长期应用肾上腺皮质激素、某些急性传染病，如伤寒极期。
49.取嗜酸性粒细胞稀释液0.38ml，加血20μl，混匀后充入计数板2个计数池中，静置3～5min，然后，在低倍镜下计数2个计数池共10个大方格内嗜酸性粒细胞数量，计算： 嗜酸性粒细胞/L＝10个大方格内的E/10*10*20*10.6 。
50.血涂片经染色后，在普通光学显微镜下作白细胞形态学观察和分析。常用的染色方法有：瑞氏染色法、吉姆萨染色法、May-Grünwald法、Jenner法、Leishman染色法等。
51.中性粒细胞：①在严重传染病、化脓性感染、中毒、恶性肿瘤、大面积烧伤等情况下，可见中性粒细胞大小不均、中毒颗粒、空泡、Dohle体、退行性变。毒性指数指中毒颗粒所占中性粒细胞（100个或200个）的百分率。1为极度，0.75为重度，0.5为中度，＜0.25为轻度。②巨多分叶核中性粒细胞：细胞体积较大，直径16～25μm，核分叶常在5叶以上，甚至在10叶以上，核染色质疏松。见于巨幼细胞贫血、抗代谢药物治疗后。③棒状小体（Auer小体）：细胞质中出现呈紫红色细杆状物质，长约1～6μm，1条或数条，见于急性白血病。MO型白血病细胞中无Auer小体，M1和M2a型均可见，M4型部分可见，M5型可见1~2条。④Pelger-Huet畸形：细胞核为杆状或分2叶，呈肾形或哑铃形，染色质聚集成块或条索网状。为常染色体显性遗传性异常，也可继发于某些严重感染、白血病、骨髓增生异常综合征、肿瘤转移、某些药物（如秋水仙胺、磺基二甲基异嚼唑）治疗后。⑤Chediak-Higashi畸形：细胞质内含有数个～数10个包涵体，直径约2～5μm，呈紫蓝、紫红色。见于Chediak-Higashi综合征，为常染色体隐性遗传。⑥Alder-Reilly畸形：细胞质内含有巨大的、深染的、嗜天青颗粒，染深紫色。见于脂肪软骨营养不良、遗传性粘多糖代谢障碍。⑦May-Hegglin畸形：细胞质内含有淡蓝色包涵体，见于严重感染。
淋巴细胞：①异型淋巴细胞：在淋巴细胞性白血病、病毒感染、百日咳、布鲁菌病、梅毒、弓形虫感染、药物反应等情况下，淋巴细胞增生，出现某些形态学变化，称为异型淋巴细胞。分为3型：Ⅰ型（空泡型，浆细胞型）：胞体比正常淋巴细胞稍大，多为圆形、椭圆形、不规则形。核圆形、肾形、分叶状，常偏位。染色质粗糙、呈粗网状或小块状、排列不规则。胞质丰富、染深蓝色、含空泡或呈泡沫状。Ⅱ型（不规则型，单核细胞型）：胞体较大，外形常不规则，可有多个伪足。核形状及结构与Ⅰ型相同或更不规则，染色质较粗糙致密。胞质丰富、染淡蓝或灰蓝色、有透明感、边缘处着色较深、一般无空泡、可有少数嗜天青颗粒。Ⅲ
型（幼稚型）：胞体较大，核圆形、卵圆形。染色质细致呈网状排列、可见1～2个核仁。胞质深蓝色、可有少数空泡。②放射线损伤后淋巴细胞形态变化：核固缩、核破碎、双核、卫星核淋巴细胞（胞质中主核旁出现小核）。③淋巴细胞性白血病时形态学变化：在急、慢性淋巴细胞白血病，出现各阶段原幼细胞，并有形态学变化。
浆细胞：正常浆细胞直径8～9μm，胞核圆、偏位，染色质粗块状、呈车轮状或龟背状排列；胞质灰蓝色、紫浆色、有泡沫状空泡，无颗粒。外周血出现浆细胞，见于传染性单核细胞增多症、流行性出血热、弓形体病、梅毒、结核病等。异常形态浆细胞有：①Mott细胞：浆细胞内充满大小不等、直径2～3μm蓝紫色球体，呈桑椹样。见于反应性浆细胞增多症、疟疾、黑热病、多发性骨髓瘤。②火焰状浆细胞：浆细胞体积大，胞质红染、边缘呈火焰状。见于IgA型骨髓瘤。③Russell小体：浆细胞内有数目不等、大小不一、直径2～3μm红色小圆球。见于多发性骨髓瘤、伤寒、疟疾、黑热病等。
52.电阻抗法血细胞计数原理（库尔特原理） 容器感应区内电阻增高，引起瞬间电压变化形成脉冲信号，脉冲振幅越高，细胞体积越大；脉冲数量越多，细胞数量越多，由此得出血液中血细胞数量和体积值。
白细胞分类计数原理 经溶血剂处理的、脱水的、不同体积的白细胞通过小孔时，脉冲大小不同，将体积为35～450fl白细胞，分为256个通道，淋巴细胞位于35～90fl的小细胞区；粒细胞（中性粒细胞）位于160fl以上的大细胞区；单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始细胞、幼稚细胞等，位于90～160fl的单个核细胞区，又称为中间型细胞。仪器根据各亚群占总体的比例，计算出各亚群细胞的百分率，并同时计算各亚群细胞的绝对值，显示白细胞体积分布直方图。
血红蛋白测定原理 血红蛋白与溶血剂中的某些成分结合形成一种血红蛋白衍生物，在特定波长（530～550nm）下比色，吸光度与稀释液中Hb含量成正比，最终显示Hb浓度。氰化钾的溶血剂，与血红蛋白作用后形成氰化血红蛋白，其最大吸收峰接近540nm。
53.光散射法白细胞计数和分类计数 ①激光与细胞化学法；②容量、电导、光散射（VCS）法；③电阻抗与射频法；④多角度偏振光散射（MAPSS）法。 光散射法红细胞检测原理 低角度（2°～3°）光散射能测量单个红细胞体积，高角度（5°～15°）光散射能测量单个红细胞血红蛋白浓度，得出MCV、MCH、MCHC值，并显示红细胞散射图、单个红细胞体积和血红蛋白含量直方图。
光散射法血小板检测原理 高角度（5°～15°）光散射能测量细胞折射指数（RI），低角度（2°～3°）光散射能测量细胞大小。在二维散射图上得出血小板数量和相关参数。 网织红细胞计数原理 ①利用新亚甲蓝使网织红细胞RNA着色，加入使红细胞内Hb溢出的试剂，使其成为“影细胞”，然后采用VCS原理，得出网织红细胞数和相关参数。②利用碱性槐黄O等荧光染料与网织红细胞内的RNA结合，以波长488nm氩氖激光束为激光源照射网织红细胞，得到前向散射光强度（细胞体积大小）和荧光强度（胞质内RNA多少），形成二维显示散点图，得出网织红细胞数和相关参数。 54.血液分析仪提供细胞体积分布图形。正常白细胞直方图，在35～450fl范围内将白细胞分为3群，左侧峰又高又陡为淋巴细胞峰，最右侧峰又低又宽为中性粒细胞峰，左右两峰间的谷区较平坦为单个核细胞峰。
表1-3 白细胞直方图变化的部分原因 白细胞直方图变化 主要原因
淋巴细胞峰左侧异常 有核红细胞、血小板聚集、巨大血小板、未溶解红细胞、疟原虫、冷凝集蛋白、脂类颗粒、异形淋巴细胞
淋巴细胞峰右移，与单个核细胞峰左侧相连并抬高 急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、异型淋巴细胞