loading管号试剂 0 1 0.4 1.6 2.0 2 0.8 1.2 2.0 3 1.2 0.8 2.0 4 1.6 0.4 2.0 5 2.0 0 2.0 标准RNA 0 溶液（ml） 蒸馏水（ml） 地衣酚试剂（ml） 2.0 2.0 2、 样品的测定： 准确称取少量的酵母RNA（0.1或0.2g）。放入小烧杯中，加少量蒸馏水调成糊状，溶解，若不溶解，用Hcl，然后调至PH7.0，小心转移到25ml容量瓶中，用蒸馏水定溶到刻度，混匀。取0.625ml样品液，稀释到40ml后，分别取2份2.0ml的稀释液，加入2.0ml的地衣酚试剂，混匀，与标准曲线的各管同时置沸水浴中加热45min，冷却，测定在670nm波长处的光密度值。 3、 RNA含量的计算： 根据测得O.D值，从标准曲线上查出相对应的RNA含量，按下式计算制品中RNA的百分含量。 RNA%=〔待测液中测的的浓度（ug/ml）/ 待测液中制品的浓度(ug/ml)〕×100 二、紫外吸收法定量测定： 1、用分析天平准确称取待测的样品RNA0.150~0.200g，加入少量的蒸馏水调成糊状，再加入少量的水稀释。用5%—6%的氨水调至PH7.0，定容到10ml。 2、取两支离心管，向第一支管中加入1ml样品溶液和1ml蒸馏水。向第二支管中加入1ml样品溶液和1ml沉淀剂，混匀。 3、在冰浴中放置30min，然后离心10min，3000r/min。 4、从各管中取出0.25ml上清液，用蒸馏水定容到25ml。 5、于260ml处测定其光吸收值（OD1、D2）。计算核酸浓度： （OD1—OD2） RMA%= 0.022 ×100 样品浓度 6、当OD260/OD280≈2.0，所提取样品纯度很高。 4.2.实验注意事项： 1、RNA浓盐法提纯时，沸水浴后需冷却后将样液转移到离心管内。离心前一定要将对应位置的离心管进行平衡。离心机使用时要待转速归为零时打开试室盖。调至PH值到2.0~2.5时，边冰水浴边用玻璃棒进行搅拌，且每滴一滴盐酸都要进行搅拌。 2、地衣酚法定性测定时，分光光度计的使用。标准曲线制作和样品测定应在同一台仪器上进行（即使用的型号一致）。若不连续测定光密度值，需暂时用遮挡光路的“黑体”（UV—2000型）或者打开试样室盖门关闭光门（722s型）。比色皿的称液量以达到比色皿容积的3/4~2/3左右为宜。每套仪器的比色皿不可随意换。 3、醋酸纤维素电泳定性测定时，常选用PH8.6巴比妥—巴比妥钠缓冲液，其浓度为0.05—0.09mol/L。选择何种浓度与样品和薄膜的厚薄有关。点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去，以免引起样品扩散，但不宜太干，否则样品不易进入膜内。点样时，动作要轻、稳、用力不能太大、以免损坏膜片。电泳时，应该选择合适的电流强度。 4、整个实验过程中，要注意试剂的准确用量以及操作的动作标准。 5、在操作实验工程中，像沸水浴时、运用到浓硫酸等具有腐蚀性的化学试剂时一定要注意个人及他人的生命安全。 6、做实验要身穿专用实验服，待做外实验后要及时的对手部进行清洁。
5．实验数据处理方法： ①用分光光度计测量出，在670nm波长处地衣酚和核糖形成的绿色复合物，在不同浓度下的光密度值。以不同的RNA浓度作为横坐标，相对应的光密度值OD作为纵坐标绘制标准曲线图，测出样品溶液的两个光密度值（OD1、OD2），求出平均值，通过测出的光密度值在标准曲线图上对应，则可知道样品溶液的密度，测出样液中RNA的含量。 ②用电泳从RNA中分离出四种核苷酸。在紫外灯下观察电泳结果（醋酸纤维素薄膜），用铅笔沿着四个区域的边沿画下来，以便不用紫外时可观察。计算出每种核苷酸的运动速率，对照书上的表格找出每个区域对应的核苷酸即可。
二．实验报告1．实验现象与结果： Ⅰ、定性鉴定部分： 一、RNA基团的鉴定： 1、嘌呤碱基和5%硝酸银的反应：放置几分钟后有白色絮状沉淀产生，见过后变为棕红色絮状沉淀。这个现象说明RNA基团中含有嘌呤碱基。 2、磷酸和定磷试剂的反应：冷却静置后看到黄色磷钼酸铵沉淀产生。这个现象说明RNA基团中含有磷酸。 3、核酸和地衣酚试剂的反应：有绿色复合物生成。这个现象说明RNA基团中含有核酸。 二、醋酸纤维素电泳分离鉴定： 待实验时间到后，取出醋酸纤维素薄膜，记住点样的位置。打开紫外灯下，将醋酸纤维素薄膜尽量与灯管水平的放置在紫外灯下进行观察，看到大概离点样品点4cm、4.5cm、5.3cm、5.8cm处各有一端阴影,如图： 分别鉴定出：胸腺、胞、尿、鸟核苷酸。 Ⅱ、定量测定部分： 一、地衣酚法定量测定： 1、标准曲线的绘制： 标准曲线（地衣酚）OD标10.80.60.40.2000.10.20.30.40.50.60.2720.24C标0.5810.8930.746 2、在相同的条件下，OD样品溶液=0.801 OD标10.80.60.40.20012345670.1, 0.2720.3, 0.24C标0.2, 0.5810.5, 0.893？, 0.8010.4, 0.746查出相对应的RNA含量 则样品溶液中RNA的含量≈0.8，因此求得： 待测液中测得的浓度（ug/ml） 0.8 RNA%= ×100= ×100=89 待测液中制品的浓度（ug/ml） 0.8988 二、紫外吸收法定量测定： 根据公式所得：RNA=0.594nm/0.330nm=1.8 所以所得样品纯度较高。