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小鼠25-羟基维生素D3(25(OH)D3)酶联免疫分析试剂盒
使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T 0.6μg/L -16μg/L 使用目的：
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中25-羟基维生素D3(25(OH)D3)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠25-羟基维生素D3(25(OH)D3)水平。用纯化的小鼠25-羟基维生素D3(25(OH)D3)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入25-羟基维生素D3(25(OH)D3)，再与HRP标记的25-羟基维生素D3(25(OH)D3)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的25-羟基维生素D3(25(OH)D3)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠25-羟基维生素D3(25(OH)D3)浓度。
试剂盒组成
1 2 3 4 5 30倍浓缩洗涤液 酶标试剂 酶标包被板 样品稀释液 显色剂A液 20ml×1瓶 6ml×1瓶 12孔×8条 6ml×1瓶 6ml×1瓶 7 8 9 10 11 终止液 标准品（32μg/L） 标准品稀释液 说明书 封板膜 6ml×1瓶 0.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 1份 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求
1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
16μg/L 8μg/L 4μg/L 2μg/L 1μg/L 5号标准品 4号标准品 3号标准品 2号标准品 1号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。