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哈尔滨理工大学制药工程专业
《科研训练》
科学研究课题申请书
课题名称 HPLC法测定利血平注射液中利血平的含量 课题申请人 指导教师
一.简表
课题名称 姓 名 HPLC法测定利血平注射液中利血平的含量 学 号 班级 制药10-1 课题简介（300-500字）： 利血平注射液是由枸橼酸、L-盐酸半胱氨酸、硫脲、浓氨水、丙二醇、注射用水制成的肌肉注射用制剂，其通过抗去甲肾上腺素能神经产生降低血压的作用，临床用于高血压危象。利血平注射液载于《中国药典》2005版[1]，其含量测定方法采用紫外吸收分光光度（UV）法。由于该制剂中辅料多达6种，所以用UV法进行含量测定时，需进行复杂的预处理，如采取不同溶剂进行多次提取，不仅操作烦琐且提取时所用的氯仿等有机溶剂对操作人员身体有严重损害。目前有很多关于以高效液相色谱（HPLC）法测定利血平注射液中利血平含量的文献报道。 因此寻找具有分离效果好,测定准确,灵敏高,专属性强、分析简便快速的分析方法是目前的一个重大课题。 课题 简介 1
二． 立项依据（800-1000字） 1．课题研究的目的、意义 目的：建立以高效液相色谱法测定利血平注射液中利血平含量的方法，替代传统的紫外吸收分光光度（UV）法。进一步优化实验条件，获得相关数据资料。为药物质量检测提供专属性强，简单、快速准确、灵敏度高,结果满意的分析方法。 意义：对利血平(化学单体原料药)及制剂利血平片、利血平注射液的含量分析, 2005年版《中国药典》(二部)均用分光光度法。但近10余年来,对于各种含利血平制剂的质量控制与分析,已有各种定量方法研究报道,如荧光分光光度法、化学发光法、电化学法、HPLC法等,其中以HPLC法的研究和应用报道最多[2 -8]。故找到一种快速、有效的分析方法是很有实际意义的。 2．国内外相关行业现状、发展趋势、市场需求、预期经济和社会效益分析 利血平(reserpine)又名利舍平,是印度萝芙木(Rauwolfiaserpentina)根中所含的一种生物碱。本药降压作用缓慢、温和而持久。利血平的降压作用与中枢和外周肾上腺素能神经末梢囊泡内递质的耗竭有关。利血平降压作用弱,用于轻度高血压,与利尿药合用效果较好。药物制剂主要有复方降压片、北京降压0号片,利血平Reserpine(英国:Serpasil;加拿大:Reserpanca;德国:Sedaraupin;美国:Abicol等)。目前国内主要生产厂家有：北京双鹤药业股份有限公司、北京万辉双鹤药业有限责任公司、北京万辉双鹤药业有限责任公司、哈尔滨泰华药业股份有限公司等。 最初利血平用于降压效果很好，但是伴有明显的副作用，且后期又有很多相当一部分新药被研发出来用于高血压。后来有研究把利血平做成复方制剂能降低其副作用，又能起很好的降压作用。故很多制药公司研发它的复方制剂。这在一部分程度上使对利血平的质量检测增加难度。 对利血平(化学单体原料药)及制剂利血平片、利血平注射液的含量分析, 2005年版《中国药典》(二部)均用分光光度法。但近10余年来,对于各种含利血平制剂的质量控制与分析,已有各种定量方法研究报道,如荧光分光光度法、化学发光法、电化学法、HPLC法等,其中以HPLC法的研究和应用报道最多。 该课题通过对HPLC法测定利血平注射液中利血平的含量的研究能给检测利血平的含量提供一个很好的检测依据，将大大降低分析人员的工作难度保证了工作中不会受到药品的危害，又可提高检测的效率。故有很大的经济效益。 2
3.课题研究的创新点 在用UV法对利血平注射液进行含量测定时，需进行复杂的预处理，如采取不同溶剂进行多次提取，不仅操作烦琐且提取时所用的氯仿等有机溶剂对操作人员身体有严重损害。本课题采用HPLC法测定含量，可以直接进样检测，具有专属性强、简单、快速准确、灵敏度高等优点。 4.参考文献 [1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：264. [2]欧阳晓玫,何英梅,常琦. RP -HPLC法测定利血平片剂的含量[J].中国药事, 2003, 17 (13): 758-759. [3]王昕,孙悦,米亚娴. HPLC法测定复方降压平片中利血平的含量[J].天津药学, 2003, 15 (6): 15-16. [4]孙丽,游强,闻京伟.反相HPLC法测定维压片中利血平的含量[J].中国药品标准, 2003, 4 (6): 27-28. [5]魏嘉陵,林才,畅伟,苏茜. RP -HPLC测定脉舒静片中罗通定、利血平的含量[J].中国药学杂志,2004, 39 (1): 60 -61. [6]赵雪梅,张淑琴.反相高效液相色谱法测定复方利血平片中6个组分的含量[J].药物分析杂志,2003, 23 (5): 334 -339. [7]车宝泉. HPLC法测定复方降压平片中5个成分的含量[J].药学学报, 2004, 39 (8): 618 -620. [8]高青,张吉,车宝泉.六种抗高血压药物液相色谱鉴别方法的研究[J].中国药科大学学报, 2005,36 (4): 330 -333. 3
三．课题研究的主要内容及实施方案 1． 课题研究的主要内容 1.1 溶液的制备（标准品溶液的制备、供试品溶液的制备、阴性样品溶液的制备)。 1.2 标准曲线的制备。 1.3 分析方法的验证（精密度试验、重复性试验、稳定性试验、加样回收率试验）。 1.4 样品含量测定 2． 实施方案 2.1 色谱条件 色谱柱：Venusil XBP- C18（200 mm×4.6 mm，5 μm）； 流动相：甲醇- 水（52∶48，用冰醋酸调酸度为pH＝（3±0.2））；检测波长：268 nm；流速：1 mL·min－1；柱温：28 ℃；进样量：10 μL。 2.2 溶液的制备 ①标准品溶液的制备。精密称取利血平标准品10 mg，置于100 mL容量瓶中，甲醇溶解并加至刻度，摇匀，即得浓度为0.1 mg·mL－1的标准品溶液，备用。 ②供试品溶液的制备。取利血平注射液以1支，精密量取1 mL置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，作为供试品溶液。 ③阴性样品溶液的制备。按处方比例取不含利血平的其它成分，照生产工艺和“②”项下方法制成缺利血平的阴性样品溶液。 2.3 专属性考察 分别吸取标准品贮备液、供试品溶液和阴性样品溶液各10 μL，按上述色谱条件进样测定。 2.4 标准曲线的制备 精密吸取上述标准品溶液适量，加入甲醇稀释至不同浓度4、6、8、10、12、14、16 μg·mL-1，分别取10 μL注入色谱仪，按色谱条件测定。以进样量（x，μg·mL-1）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标制备标准曲线。 2.5 精密度试验 取浓度为10 μg·mL-1的标准品溶液10 μL，重复进样6次，测定并计算RSD。 4