解脲支原体(UU)核酸检测试剂盒(PCR荧光法)说明书

解脲支原体（UU）核酸检测试剂盒(PCR荧光法)说明书

【产品名称】

通 用 名：解脲支原体(UU)核酸检测试剂盒(PCR荧光法)

具有FAM荧光通道的ABI7000型荧光PCR扩增仪。

【样本要求】

英 文 名：Ureaplasma Urealyticum polymerase chain reaction (PCR) Fluorescence

Diagnostic Kit

【包装规格】 32人份/盒

【预期用途】

可作为临床实验室对男性尿道拭子样本或女性宫颈拭子样本中解脲支原体核酸定性检测，为临床早期发现尿道炎或子宫颈炎及性病高危人群的筛查提供分子生物学上的参考依据。 适应症：由解脲支原体感染引起的尿道炎及宫颈炎

【检验原理】

本试剂盒选用解脲支原体(UU)保守基因片段设计特异引物及特异Taqman 探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA模板发生特异性结合，在PCR延伸反应过程中，Taq酶的外切酶活性将5’端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3’端荧光淬灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从而实现在全封闭反应体系中对解脲支原体(UU)核酸的自动化检测。

【主要组成成份】

组成 成分 规 格 核酸提取液 含0.4M NaCl 、 10mM NaOH 、0.5%NP-40、0.5%Triton-100、5%Chelex-100 1.8ml×1 含Tris-HCl(pH8.9) 10mmol/L、 KCl 50mmol/L、MgCl2 UU反应混合液 4 mmol/L、dTTP、dATP、dGTP、dCTP各 100umol/L、引物A 100nmol/L、引物B 100nmol/L、探针 1.2ml×1 75nmol/L、BSA 200ug/ml Taq酶 含Taq DNA 酶及抗体 14ul×1 UU阳性对照 主要成份为UU基因组DNA(重组克隆) 100ul×1 阴性对照 主要成份为0.9%NaCL 100ul×1 注: 不同批号试剂盒中各组份不可以互换

【储存条件及有效期】

试剂-20℃可保存12个月，未使用完的试剂继续冷冻保存不影响其稳定性，但试剂反复冻融不得超过三次。

【适用仪器】

1

1. 标本：男性尿道拭子样本或女性宫颈拭子样本

2. 采集容器：应当选用国家批准生产的一次性使用的男性拭子或女性拭子，拭子应当包括套管、棉签杆、塞子，棉签杆与塞子都应连接牢固。 3. 采集：样本采集具体方法请参考《微生物标本采集手册》一书。

【男性】先清洁尿道口，要求病人在采样前2小时不能排尿。取尿道分泌物或细小棉拭子伸入

尿道约2-4cm，略捻拭子取出分泌物（应略带黏膜）。将分泌物或棉拭子置入无菌玻璃管，密闭送检。

【女性】先用棉/麻拭子将宫颈口过多的分泌物擦去，用扩阴器扩阴，再换取棉拭子伸入宫颈，

通过上皮交界处，直到看不到拭子头，旋转10-20秒，取出拭子，将拭子置入无菌玻璃管中，密闭送检。

4. 存放：2-8℃保存，不超过24小时；-20℃下保存，不超过3个月；-70℃下长期保存，但应避免反复冻融。

5. 运输：采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。

1. 样本处理【样本处理区】

(1) 标本试管中加入1ml无菌生理盐水(冻存标本使用前在室温融解并充分混匀)，充分震荡摇

匀，吸取液体转至1.5ml离心管中，12000rpm离心5分钟。弃上清取沉淀加入50μl 核酸提取液(内含固体沉淀颗粒物，为使颗粒均匀分布，每次取样时请用吸头反复吸打)，混匀后2000rpm离心10sec，100℃水浴或干浴10min，12000rpm离心10min，上清供PCR扩增用（如样本裂解产物当天不使用，请于-20℃保存）。

(2) 阴性对照、阳性对照直接取出50μl，加入50μl核酸提取液，混匀后100℃水浴或干浴10min。

12000rpm离心10min，备用。

2. 试剂配制【试剂准备区】

从试剂盒中取出UU反应混合液，在室温下融化并振荡混匀后，2000rpm离心10sec。计算需准备反应试剂人份数[n=样本数+2管对照品]。每人份反应体系配制如下：

试 剂 UU反应混合液 Taq酶 用 量 35.6μl 0.4μl 计算上述各试剂的使用量，加入一适当体积的离心管中，充分混匀后，按36μl量分装到PCR反应管中，转移至样本处理区。

3. 加样【样本处理区】

【检验方法】 分别加入4μl的阴性对照、UU阳性对照、样品处理上清液，盖紧反应管，转移至检测区。 4. PCR扩增及荧光检测【PCR检测区】

将各反应管按一定顺序放入PCR仪上，按以下程序进行PCR扩增： 步 骤 1 循 环 数 1 温 度 95℃ 94℃ 时 间 3min 15sec 9. 实验中用过的吸头请直接打入盛有1%的次氯酸钠的废物缸内，并与其他废弃物品一同灭菌

后丢弃。

10. 工作台及各种实验用品应定期用1%的次氯酸钠、75%酒精或紫外灯进行消毒。 11. PCR反应混合液应避光低温保存。

12. 不同批号的试剂请勿混用，并请在有效期范围内使用。

【参考文献】

2 40 60℃ 30sec 检测荧光选择：请选择FAM荧光检测。

阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照品的最高点. 阳性对照Ct值应小于38, 阴性对照Ct无数值；在阈值以上的荧光曲线应当是具有明显的S型曲线，否则该次实验视为无效,应检查仪器、试剂、扩增条件等方面的误差. 1. 检测样本Ct值≤37.0者判为阳性

2. 检测样本Ct值>37.0的样本建议重做,重做结果Ct值<40者为阳性,否则为阴性

检测结果不能直接作为临床确诊或排除病例的依据，仅供临床医生参考使用。

1. 灵敏度: 本试剂盒的产品检测下限为500copies/ml。

2. 特异性: 本试剂盒与沙眼衣原体（CT）、淋球菌（NG）、HPV样本无交叉反应。 3. 精密度：一份弱阳性的标本连续重复10次检测，其Ct值的CV值小于10.0%。

1. 有关实验室管理规范请严格按照行业行政主管部门颁布的有关基因扩增检验实验室的管理

规范执行。

2. 本试剂盒仅用于体外检测。 3. 实验室严格分区操作：

第一区：试剂准备区-准备扩增所需试剂

第二区：样本处理区-待检测样本和对照品的处理 第三区：PCR检测区-PCR扩增检测

4. 各区物品均为专用，不得交换使用，避免污染，每次实验完后立即清洁工作台。 5. 使用不含荧光物质的一次性手套、一次性专用离心管、自卸式移液枪和带滤芯吸头。 6. 反应液分装时应尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄

露污染仪器

7. 加样时应使样品完全加入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。 8. 扩增完毕请立即取出反应管，密闭在专用塑料袋中，放于指定地点，等待统一处理。 2

1. 《体外诊断试剂说明书编写指导原则》 2. 《临床实验室定量测定室内质量控制指南》 3. 《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》 4. Real time quantitative PCR. Genome Res. 6:986–994.

5. Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reaction.

Bio/Technology11:1026–1030.

6. Williams JF. Optimization strategies for the polymerase chain reaction. Biotechniques 1989,

7:762-768.

企业名称:：艾康生物技术（杭州）有限公司 地址：杭州市天目山路398号 邮政编码：310023 电话:：0571-87775858 传真号码：0571-87775851 网址:：www.aconlab.com.cn 浙食药监械生产许20120007号

国食药监械（准）字2011第3400538号 YZB / 国 0906-2011 2011.04.27

1150530403

【检验结果的解释】【检验方法的局限性】 【产品性能指标】【生产企业】【注意事项】

【医疗器械生产企业许可证编号】【医疗器械注册证书编号】【产品标准编号】【说明书批准及修改日期】