loading流式常用试剂配制
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一、流式细胞术常用试剂?
１、1０％NａN3：将１0gNaＮ３溶解于100ml蒸馏水中,室温保存；活体实验或在辣根过氧化酶反应中可不使用NaN3。 ?2、3%BSA／PBS:１00ml PBS中加入３g BＳA，使之溶解，再加入0.２mｌ 10%的NaN3。?
3、5００mmol／Ｌ EＤＴＡ:将186g EDＴA?Na2?2H2O溶解于40０ml蒸馏水中,用NaＯＨ将PＨ调至8.０，补充蒸馏水至500ｍｌ,分装,高压灭菌,室温保存。4??、4%多聚甲醛:在磁力搅拌下，将4g多聚甲醛溶于100ml PBS，加入数滴ＮａOH,在通风柜中于60度加热，使其溶解，调整PH至7.4,使用前新鲜配制。
?5、消化液:0．２5%胰蛋白酶（用培养液或ＰBS配制)或0.25%胰蛋白酶与0.02％ EDTＡ的混合液。6??、红细胞裂解液:NH4Cl 4．１6g,KHＣＯ3 0.5ｇ,EDTA?2Nａ 0．02g，溶于10０ml水中，调PH至7.2，补充蒸馏水至500ml，4度储存，使用时需恢复至室温。? 7、流式细胞抗体稀释剂：0.1mmol/L PBS液（ＰH 7.4)+１%BSA＋0.1％Na2N３。
?8、常用细胞破膜剂：PBS液(PH 7.4)＋1?Ｓ（或ＢSA)+0．１％ＮａN3+0．1％sapoｎiｎ(Siｇｍa的效果不错)。9??、流式细胞染色洗涤液:含2%的BＳA、0.１％ＮaN3的PＢＳ（PH 7.４)。 ?1０、PＩ染液(保存液，10×,用于细胞周期和凋亡检测):10mｇ PI溶于10ml PBS，加入2mg无DＮＡ酶的RＮA酶，4度保存备用。应用时，10倍稀释，每管加０.３ml~０.5ml ＰI染液。
?1１、Hanks液的配制（ＢＳS,主要用于培养液、稀释剂和细胞清洗液,不能单独作为细胞、组织培养液)?原液A?ＮaCl 1６０g?MgSO４?７Ｈ2Ｏ 2g KCｌ 8ｇ?MgCl?6H2O 2g
ＣaCl2 2．８ｇ?溶于１00０ml双蒸水?原液B1?)Na2ＨPO4?1２H2O 3.0４g KH2PO4 1.2ｇ?葡萄糖 2０．0ｇ 溶于800ｍｌ双蒸水 2）0.4％酚红溶液:取酚红0．４g置玻璃研钵中,逐滴加入0.1Ｎ NaOH并研磨,直至完全溶解,约加入0.1N ＮaOH 10mｌ。将溶解的酚红吸入１00ｍl量瓶中,用双蒸水洗下研钵中残留的酚红液，并入量瓶中,最后补加双蒸水至100ｍl。
将1）液和2)液混合,补加双蒸水至1000ｍｌ即为原液B。 应用液： ?原液A １份 原液B 1份?双蒸水 18份 混合后，分装于２00ｍl小瓶中，高压灭菌。临用前用无菌的５.６%NaHCＯ3调PH至7.2～7.6。 12??、磷酸盐缓冲液的配制（ＰＢ)
A液(0.2mｏｌ／L NａＨ2PO4水溶液):
ＮaH２PO4?Ｈ2Ｏ 27.6g，溶于蒸馏水中,稀释至10０0mｌ。
B液（0.2mol/Ｌ Na2ＨＰO4水溶液）:
Na2ＨＰＯ4?7Ｈ2O ５3.6g 加蒸馏水溶解,加水至１000ｍｌ。
不同PＨ值ＰB的配制：
A液ｘml（参照下表)中,加入Ｂ液ｙml，为0.2mｏｌ/L的PB。若再加蒸馏水至20０mｌ,则成0.１mｏｌ／Ｌ PＢ。 PＨ x/ml y/ml