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5 10×电极缓冲液，pH8.3（pH8.3-甘氨酸缓冲液） Tris 30克，甘氨酸144克，SDS 10g，溶于无离子水后定容至1000 ml，用时稀释10倍。 考马斯亮蓝R-250 0.125g、50%甲醇227 ml(即甲醇113.5加水113.5毫升)，冰乙酸23毫升。总体积250毫升 冰乙酸75毫升，甲醇50毫升，加水至1000毫升 6 染色液 7 脱色液 五、实验步骤 1、凝胶的制备
（1）将贮液由冰箱取出，待于室温平衡后再配制工作液。
（2）用橡皮圈把凝胶管扎起，垂直放在小培养皿中，倒入2%琼脂糖溶液，令其自然凝固。 （3）按下表比例配制分离胶：
表1配制分离胶比例
名称 分离胶缓冲液 Acr-Bis贮液 1.3 ml 2 ml 过硫酸铵 150 μl TEMED 10 μl 重蒸水 1.6 ml 取用量（5ml） （4）灌分离胶：分离胶缓冲液和Acr-Bis贮液和重蒸水放一烧杯，加入过硫酸铵和TEMED然后小心混合溶液，用长滴管取混合的溶液。沿管壁加入胶液，当加到玻璃管高度2/3时，在表面覆盖一层水，刚加过水可看出界面，后逐渐消失，等在看出界面时，表明分离胶已聚合。再静置20-30分钟，吸取表面水分，（正常情况10 min开始聚合，应控制在30min～1h内聚合完成）。
（5）浓缩胶的制备：按下表比例配制浓缩胶。
表2配制浓缩胶比例
名称 浓缩胶缓冲液 Acr-Bis贮液 0.25 ml 0.33 ml 过硫酸铵 450 μl TEMED 5 μl 重蒸水 1.4 ml 取用量（2ml） （6）灌浓缩胶：浓缩胶缓冲液和Acr-Bis贮液和重蒸水放一烧杯，加入过硫酸铵和TEMED然后小心混合溶液，用长滴管取混合的溶液。沿管壁加入胶液，当加到分离胶上面约1cm高度，表面覆盖一层水，聚合20-30分钟，除去表面水分。 2、样品的制备
蛋白质样品200微升，上样缓冲液25微升混合，留作点样用。 3、装槽、点样
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（1）装槽：装下槽电极缓冲液，将稀释10倍的电极缓冲液约100 ml放入下槽，安好装有凝胶管的上槽；
装上槽电极缓冲液，在上槽内加一滴溴酚蓝指示剂，将稀释10倍的电极缓冲液放入上槽，淹没凝胶管上端1-2 cm。
（2）点样：用微量注射器在浓缩凝胶顶部加样，加样时，微量注射器的针头伸入凝胶孔的内部,但针头不要碰到胶面，缓缓加入，因样品比重较大，因此样品液自动沉降在胶面上平铺成一层。 4、电泳
按正负极接通电源，打开电泳仪（仔细观察正负极的变化）。电流控制在1mA/管，待溴酚蓝至分离胶时，加大电流升到2mA/管，太高的电流强度会造成产热量大，使分离失效。如果高温对样品不利，可降低电流，延长时间，或进行有效的冷却。待指示染料迁移至下沿约0.5 cm处停止电泳，需2---3 h。
5、剥胶：电泳结束，取下凝胶管，用注射器沿玻璃管壁慢慢注入蒸馏水转动360度，小心地将凝胶压出（用洗耳球）。
6、固定，染色及脱色：：将取下的胶条放入染色液中染色8~15 h，这期间用保鲜膜将染色盘封好，置于水平摇床上，最好避光染色。注意：染色液一般为凝胶体积的5~10倍。脱色后显现出清晰的蛋白点。 六、注意事项
1、配好的贮液用棕色瓶盛装冰箱内保存，可放1~2个月。（使用前真空泵抽气10 min ） 2、过硫酸铵应当天配制。 3、如有不溶物要过滤。 4、显色液用前再混合。 5、电极缓冲液用时稀释10倍。
七、思考题
每组同学的样品，经过电泳分离之后，蛋白质的条带会有什么差异吗？说明原因。
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第四部分 鱼类种群生物指标的测定
实验八 鱼类种群形态学性状的测定
一、实验目的
通过对鱼类可量和可数性状的大量测定和统计分析，要求确立种群的概念，掌握传统的依据形态学特征鉴别种群的原理和方法。 二、基础理论
种群在生态学上可以理解为种内个体栖息在同一生态环境（或同一水体）里所形成的组合群。由于多数物种在自然界的分布呈镶嵌型，即以不规则的组合群或间隙的格局存在。如果间隙宽到一定的程度，就可以把所调查区域内所有同种个体作为一个种群、或群体来研究。因此，一个种群与同种的另一种群常有某种程度的地理或生态隔离（间隙），从而在遗传上造成离散性，导致相互间在形态、生态、生理以及数量变动上的差异。这些差异就成为鱼类种群鉴别的基础。
形态学性状测定是鉴别种群最常用的方法之一。主要是通过对鱼类个体的可数性状和
可量性状的大量测定，然后用生物统计法进行归纳、分析和判别。通常，对比单项特征的差异，常用均数差异显著性检验（Mdiff）公式；若需要综合检验多项特征之间的差异，可用判别函数分析法。可数性状主要包括鳍条、侧线鳞、鳃耙、脊椎骨和幽门盲襄等。可量性状长期来主要以体长、体高、头长、眼径和吻长等为测定指标，称传统测定法。但近十年来，国外一些学者认为：传统测定法研究的形态度量特征，集中于从头部到尾部的长轴上，不足以包含整个体形，因而提出了一种把鱼体分成若干网格(图E-1)，测量各联结点距离的方法，称为框架形态测定分析法。不同体型的鱼种可有不同的框架。李思发等(1991)
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采用传统、框架以及传统+框架三种方法，研究分析团头鲂种群的形态差异，证实框架测定法能显著提高对种群的判别。 三、材料和器材
随机任选一批鲫的标本；如有两批采自不同地区的同一种标本，予以比较则更为理想。标本数根据学生人数确定。所需器材为量鱼板、两脚规、镊子、天平、放大镜、解剖盘和烧锅等，以及根据所要求观测项目所设计的生物学资料登记表。 四、步骤和方法
每两人一组，测定10尾标本。
1、编码：用小纸片给标本编好号码，贴在鳃盖上。第一组为1—10，第二组为11—20，依次类推。在登记表上填写鱼名、编号、标本采集日期，渔具、地点，测定人和测定日期等。
2、传统测定项目：在量鱼板上测量全长、体长；用两脚规测体高、体宽、头长、吻长、眼径等。若干测量项目标准如下。
全长——从鱼体最前端至尾鳍末端的水平长度。
体长——从鱼体最前端至尾鳍基最后一个鳞片的水平长度。 体高——鱼体背缘至腹缘间的最大垂直距离。 体宽——鱼体两侧最宽处的距离。
头长——从鱼头部最前端至鳃盖骨后缘的水平长度。 吻长——从吻端至眼眶前缘间的水平长度。 眼径——与鱼体纵轴平行的眼眶内径水平长度。 尾柄长——从臀鳍基部末端至尾鳍基的水平长度。 尾柄高——尾柄部最低高度。
3、 框架测定项目，按团头鲂的体型(图E—1)，可供潮钠框周项有：2—4，4一书，6—8，8—10，1—3，3—5，，5—7，7—9，2—1，4—3，6—5，8—7，10一9；框内项有：1--4，2—3，4—5，3—6，6—7，5—8，8—9，7一10，共21项。
(4)计数项目。鳍式——记载背鳍(D)、臀鳍(A)的鳍式。真棘数用大写罗马字，假棘，又称刺，用小写罗马字；鳍条用阿拉伯数字表示；棘和鳍条之间可用圆点。例如，鲫的背鳍鳍式：Diii·15~19。 侧线鳞式——侧线鳞
侧线上鳞例如，鲫的侧线鳞式：
侧线下鳞至腹鳍(v)或臀鳍(A)16