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微生物检验
第六章 微生物学检验概述
临床微生物检验的目的和要求 临床微生物检验的目的
1.为临床感染性疾病的诊断提供病原学依据。
2.为临床感染性疾病的治疗提供参考用药的信息。 3.为医院感染提供病原微生物及其耐药性动态信息。 4.改进或更新临床微生物检验的方法。 临床微生物学检验的要求 1.快速、准确地提出检验报告。
2.检验人员必须有较丰富的微生物学基础知识和熟练、正确的操作技能，必须养成有菌观点和无菌操作的习惯。
3.临床微生物检验必须进行全面质量控制，并参加和接受质量控制考核。 4.重视实验室消毒灭菌工作。 诊断试验的选择原则 1.选择有鉴定价值的试验。 2.选择简易、快速、方便的试验。 3.综合考虑试验的敏感性和特异性。
标本的采集和运送 标本采集一般原则 1.早期 2.无菌 3.方法 4.适量 5.安全 1.早期采集
病程早期、急性期或症状典型时，而且必须在使用抗生素或其他抗菌药物之前采集。 2.无菌采集 严格进行无菌操作；
与外界相通的腔道，如窦道标本应由窦道底部取样； 从正常菌群寄生部位（如口腔）采集的标本，采用特殊选择性培养基； 盛标本的无菌容器须先经高压灭菌、煮沸、干热等物理方法灭菌，或用一次性无菌容器，而不能用化学处理。
3.根据目的菌的特性用不同的方法采集
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如尿液标本，疑为厌氧菌感染时，应以无菌注射器从耻骨上缘行膀胱穿刺术抽取；若怀疑是需氧或兼性厌氧菌的感染，则可通过自然导尿获取标本。 4.采集适量标本
采集量不应过少，有些标本还要注意在不同时间采集不同部位标本。如肠热症患者，发病的第1周应采集血液，第2周应采集粪便和尿液，否则影响细菌检出率。 5.安全采集
采集标本时要注意安全，防止传播和自身感染。 标本的处理
立即送检：一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检。 适当保存：支气管洗液、心包液、痰、尿等标本应保存在4℃环境中。脑脊液、滑膜液要在25℃保存。保存时间不超过24h。 安全防护
运送包装：防止渗漏。
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直接镜检：初步诊断，5～10min。标本经涂片染色或制备湿片镜检，有些标本如尿液、脑脊液等经过离心浓缩后镜检出其初步结果对疾病诊断有参考价值。直接镜检对于确定进一步检出步骤及鉴定方法也很有帮助。另外，直接镜检还可评价标本是否符合检验要求。 快速诊断：特异性抗原和核酸检测。 直接药敏试验
报告：直接镜检2h内报告；初步鉴定和直接药敏24h；最后鉴定和细菌药敏结果一般不超过3d。
血清学诊断
人体感染病原体后经过一定时间产生特异性抗体，这种抗体在体内一般可持续数月或更长，用已知抗原检测病人血清中抗体。
一般要在病程早期和晚期分别采血清标本2～3份检查，抗体效价呈4倍或以上增长才有价值。
临床微生物实验室安全措施和质量保证 实验室感染来源 1.微生物气溶胶。
2.接触感染材料或使之附着于衣服带出室外、菌液滴落于物体表面，注射时不慎刺破皮肤等。 感染性废弃物的处理
1.任何污染材料未经消毒不能拿出实验室。
2.液体废弃物必须收集在防漏、未破的容器内，经高浓度的化学消毒剂处理。 3.对剩余标本、接种过的培养基、菌种等丢弃前均需适当消毒。
4.动物房的废物在处理前及动物笼被清洗前均需消毒，最好经高压蒸气灭菌。 5.对于任何有污染的锐器如针头、注射器、玻片等在处理前不要用手接触。 微生物实验室的室内质控 1.对细菌检验人员的要求； 2.操作手册；
3.仪器设备的功能监测； 4.培养基的质量控制；
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5.试剂、染色液以及抗生素的质量控制； 6.标本检验的质量控制；
7.标准菌株的来源和保存及室内质量的全面控制。 动物试验
主要用途：分离和鉴定病原微生物，检测细菌毒性产物，观察病原微生物的致病性。 实验动物：大鼠、小鼠、豚鼠、家兔及绵羊等。 接种方法：皮下/皮内/肌内/腹腔/静脉/脑内注射等。
发光分析技术
依赖酶或化学反应释放能量引起发光物质（如鲁米诺、荧光素等）发光的检测方法。 根据发光原理，主要分为生物及化学发光两种方法。 鲎试验
鲎试验阳性表明有革兰染色阴性菌或内毒素血症，也可用于生物制品或注射液的内毒素污染检测。
分子生物学在病原微生物中的应用
分子生物学：从分子水平上研究生物的生命活动及其规律的科学。
基因诊断：应用基因工程技术对生物体的基因组DNA片段及其转录产物进行定性和定量分析，进而对人体状态和疾病作出诊断。 （一）核酸杂交 （二）聚合酶链式反应 （三）生物芯片技术 标本采集的一般原则，不包括 A.早期采集 B.无菌采集
C.根据目的菌的特性选用采集方法 D.采集适量标本 E.每天清晨采集
『正确答案』E
『答案解析』标本采集的一般原则包括①早期采集；②无菌采集；③根据目的菌的特性用不同的方法
采集；④采集适量标本；⑤安全采集。
微生物诊断试验的选择，正确的是 A.选择有鉴定价值的试验 B.只要快速、简易即可 C.选择多种特异性试验 D.选择高特异性的试验
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临床检验技士考试辅导 E.选择高灵敏度的试验
『正确答案』A
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『答案解析』诊断试验的选择原则：①选择有鉴定价值的试验；②选择简易、快速、方便的试验；③
综合考虑试验的敏感性和特异性。
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