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7.7.3.5二甲基甲酰胺，色谱纯。 7.7.4 色谱条件 7.7.4.1 检测条件 7.7.4.1.1 载气：氮气。
7.7.4.1.2 进样方式：顶空分流（分流比=1：10）。 7.7.4.1.3 载气流量：1.2mL/min。 7.7.4.1.4 进样体积：1mL。 7.7.4.1.5 进样口温度：200℃。 7.7.4.1.6 检测器温度：260℃。 7.7.4.1.7 升温程序：见表14。
表14 升温程序 序号 1 2 3 温度设定（℃） 初始温度 程序升温 终点温度 柱温（℃） 40 35℃/min 240 保持时间（min） 8 5.7 5
7.7.4.1.8 顶空条件：见表15。
表15 顶空进样条件
样品制备程序 平衡温度（℃） 平衡时间（min） 传输线温度（℃） 操作参数 105 30 110 7.7.5 溶液制备及测定 7.7.5.1标准品溶液的制备
精密称取甲醇0.2g（称准至0.1㎎）于100mL容量瓶中，用二甲基甲酰胺定容,混匀。取该液0.1mL于100mL容量瓶中,用二甲基甲酰胺稀释至100mL,配制成甲醇浓度为2μg/mL的标准品使用溶液。精密称取乙酸乙酯1.0g、丙酮0.1g、正己烷0.1g，按上述相同方法配制成乙酸乙酯浓度为10μg/mL、丙酮浓度为1μg/mL、正己烷浓度为1μg/mL。取该标准品溶液5.0 mL加入到20mL顶空瓶中，立即塞紧瓶盖，同时压紧铝盖，备用。 7.7.5.2供试品溶液的制备
精密称取供试品0.5g（称准至0.1mg）于20mL的顶空瓶中，加入二甲基甲酰胺5.0mL，立即塞紧瓶盖，同时压紧铝盖，备用。 7.7.5.3 测定
标准品溶液和供试品溶液顶空进样，注入气相色谱仪，记录色谱图。 7.7.6 结果计算
溶剂残留甲醇（或乙酸乙酯、或丙酮、或正己烷）以w7计，按式（A.7）计算：
w7?V4?c2?A7A8?m4????????????????????(A.7)
式中：
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w7——供试品中甲醇（或乙酸乙酯、或丙酮、或正己烷）残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A7——供试品溶液中甲醇（或乙酸乙酯、或丙酮、或正己烷）的峰面积； A8——标准品溶液中甲醇（或乙酸乙酯、或丙酮、或正己烷）的峰面积；
c2——标准品溶液中甲醇（或乙酸乙酯、或丙酮、或正己烷）的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V4——样品溶液定容体积（mL）； m4——供试品质量，单位为克（g）。
7.7.7 色谱系统稳定性试验
表16 色谱系统稳定性试验结果
样品 编号 1 2 3 4 5
甲醇 峰面积 3875 3475 3599 3496 3597 3608.40 159.47 4.42
甲醇保留时间 min
1.986 1.974 1.976 1.973 1.982 1.978 0.006 0.28
乙酸乙酯 峰面积 265412 271456 234651 240368 242684 250914.2 16398.19 6.54
乙酸乙酯保留时间min 3.259
3.249 3.246 3.251 3.254 3.252 0.005 0.15
X
SD RSD
表17 色谱系统稳定性试验结果
样品 编号 1 2 3 4 5
丙酮 峰面积 489396 502348 521034 520058 512301 509027.4 13290.55 2.61
丙酮保留时间min
4.701 4.689 4.692 4.719 4.683 4.697 0.014 0.30
正己烷 峰面积 274456 254132 278421 267412 246744 264233 13451.86 5.09
正己烷保留时间min
6.452 6.446 6.439 6.441 6.446 6.445 0.005 0.079
X
SD RSD
7.7.7.1 精密度要求
取多次平行测定结果的相对标准偏差为测定结果。甲醇、丙酮、乙酸乙酯、正己烷峰面积相对标准偏差应不大于10%。 7.8 重金属检查法 7.8.1 操作步骤
取炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸0.5mL，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后（或取供试品一定量，
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缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5-1.0mL，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5mL，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500～600℃炽灼使完全灰化），放冷，加盐酸2mL，置水浴上蒸干后加水15mL，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸缓冲液（Ph3.5）2mL，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加水稀释成25mL，作为甲管，另取配制供试品溶液的试剂，置蒸发皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（Ph3.5）2mL与水5mL，微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成25mL，作为乙管；再在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2mL,摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，甲管中显出的颜色与乙管比较，不得更深。结果见表8.
表18 重金属添加试验结果（与0.002%含量铅标准管比较）
样品编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9
试剂空白 － －
样品 － －
0.001%铅含量
样品
± ±
0.002%铅含量
样品
＋ ＋
0.003%铅含量
样品
＋＋ ＋＋
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注：－表示无色，±表示暗色不明显，＋表示可见暗色，＋＋表示暗色加深。 8 标准起草过程
2012.6 第四届植物提取物分会理事会第一次会议，植物提取物标准会员会成立，接受水飞蓟提取物标准制定任务。
2012.7 成立标准起草小组。开展制标文献调研，完成资料搜集和整理工作。按照要求,确定本标准的技术指标和检验方法，同时完成实验材料的采购和准备。开展前期验证试验工作。
2012.8～2012.9完成技术指标和分析方法的确定工作。对样品各项技术指标的检测方法进行了方法验证。按照GB/T1.1-2000、GB/T20001.2-2001和GB/T20001.4-2001的要求，编制标准文本初稿和编制说明初稿。
2012.9～2012.11修改整理上报标准文本、完善实验数据等相关资料。提交送审稿。 9结论
本标准采用了《美国药典》（U.S. Pharmacopeia National Formulary）及《欧洲药典》（European pharmacopoeia 7.0）中水飞蓟提取物内容，增加的测定项目有：粒度、堆积密度、重金属、溶剂残留。本标准采用的项目、指标、检测方法及其他引用文件来自《美国药典》、《欧洲药典》、《中国食品安全国家标准》及《中华人民共和国药典》2010版，引用规范性文件符合国标制定的要求。综合上述验证结果，上述标准中规定的检验方法都是可行的，方法的准确性和重现性可靠。
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10参考文献
[1] USP35-NF30，Powdered Milk Thistle Extract；
[2] European pharmacopoeia 7.0，MILK THISTLE DRY EXTRACT,REFINED AND STANDARDISED； [3] 《中华人民共和国药典》2010版一部水飞蓟
[4] 国家药品监督管理局—国家药品标准
[8] 《中华人民共和国药典》2010版二部附录Ⅸ E 粒度及粒度分布测定法，北京：中国医药科技出版
社；
[9] 《中华人民共和国药典》2010版二部附录Ⅷ H 重金属检查法第二法； [10] 《中华人民共和国药典》2010第二部附录Ⅷ L 干燥失重测定法； [11] 《中华人民共和国药典》2010第二部附录Ⅷ N 炽灼残渣的测定；
[12] 《中华人民共和国药典》2010第二部附录Ⅺ J微生物限度检查法进行测定； [13] 《中华人民共和国药典》2010第二部附录Ⅷ P残留溶剂测定法； [14] 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则，GB/T1.1-2009； [15] 标准化工作指南 第2部分：采用国际标准的规则，GB/T20001.2-2002； [16] 标准编写规则 第4部分：化学分析方法，GB/T20001.4-2001。
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