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猪色素上皮衍生因子（PEDF）试剂盒（ELISA）
利用说明书
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中猪色素上皮衍生因子（PEDF）的含量。 有效期：6个月 保留条件：2-8℃
本试剂盒仅供体外研究利用，不用于临床诊断
实验原理
试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）。往预先包被猪色素上皮衍生因子（PEDF）捕捉抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，通过温育并完全洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪色素上皮衍生因子（PEDF）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处置及要求 1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃留宿后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保留，但应幸免反复冻融。
2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本搜集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保留，但应幸免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS , pH=冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会阻碍测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一样按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可依如实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，能够对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培育物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保留，但应幸免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本处置 1. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因利用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请利用者利用前充分考虑到样本的可能利用量，预留充沛的样本。
2. 实验前应预测标本含量，若是标本浓度太高，应付标本进行稀释，使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。标本利用L的PBS稀释(PH=。
3. 假设所检样本不包括在说明书所列样本当中，建议进行预实验验证其有效性，并注意留存样本。
4. 利用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入致使ELISA实验结果误差。
5. 假设样本为细胞培育上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时刻等，因此可能存在检测不出的情形。
6. 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所利用的检测抗体及捕捉抗体不匹配，而不被检测出。
7. 建议利用新鲜样本，保留时刻太长可能会存在蛋白降解或变性致使实验结果误差。
需要而未提供的试剂和器材 1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 4. 蒸馏水或去离子水
试剂盒组成 名称 微孔酶标板 标准品 样本稀释液 检测抗体-HRP 20×洗涤缓冲液 底物A 底物B 终止液 96孔配置 8孔×12条 *6管 6mL 10mL 25mL 6mL 6mL 6mL 48孔配置 8孔×6条 *6管 3mL 5mL 15mL 3mL 3mL 3mL 备注 无 无 无 无 按说明书进行稀释 无 无 无