血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法
1. 实验原理
脲酶-谷氨酸脱氢酶(Urease-GLDH)连续监测法。尿素被脲酶水解产氨。在NADH的存在下,氨和α-酮戊二酸反应生成谷氨酸,NADH同时被氧化成NAD。NADH的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是连续监测法。 脲酶
尿素 + 2H2O 2 NH4 + 2 HCO3 谷氨酸脱氢酶
NH4+α-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD
+
+
+
-
+
+H2O
2 标本:
2.1 病人准备:血清无特殊要求。要留取24小时尿样。 2.2 类型:血清、血浆(不可使用肝素铵)、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清,如果必须使用血浆,建议使用无铵离子的抗凝血剂,如EDTA和肝素钠。用新鲜尿液作样品时,用蒸馏水作1:100稀释。
3. 标本存放:血清或血浆稳定性:4~25℃保存可稳定7天;-20℃保存可稳定1年。尿液稳定性:20~25℃保存可稳定2天;4~8℃保存可稳定7天;-20℃保存可稳定1个月。
4. 标本运输:常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准:细菌污染的标本。 6. 实验材料
6.1 试剂:奥林巴斯尿素测定试剂盒 试剂1:+试剂2: 6.1.1 试剂准备:试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存
试剂保存于2~25℃,若无污染,可稳定至失效期。试剂不可冰冻。
6.1.3 变质指示:当试剂有看得见的微生物生长,有浊度,或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。
6.1.4 注意事项:此试剂为体外诊断用。不要入口,吞下有害。保护剂为叠氮钠,避免接触皮肤及粘膜,与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物,即使只含有少量的
叠氮钠,如果排向下水道请用大量的水冲洗。应采取必要的预防措施使用试剂。
6.2 校准品:使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品:具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器:奥林巴斯AU2700生化分析仪 8. 操作步骤
8.1 项目基本参数:参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2 仪器操作步骤:参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制:在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法:以TruCal U复合校准品尿素氮校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果,以mmol/L报告。将尿素量乘以系数2.8可以换算成尿素氮量;将尿素氮量乘以系数0.357可以换算成尿素量。手工测定计算方法为: Au
尿素氮浓度(mmol/L)= ×校准液浓度 As 12. 参考值范围 血清/血浆
[1]
成人(mmol/L)
全球 2.8~7.2 女性<50岁 2.6~6.7 女性>50岁 3.5~7.5 男性<50岁 3.2~7.3 男性>50岁 3.0~9.2 儿童
1~3岁 1.8~6.0