loading附录二 常用的培养基及试剂
1、糖发酵管 成分：
牛肉膏 5g 磷酸氢二钠 2g 蛋白胨 10g 0.2溴麝香草本分蓝深液 12 ml 氯化钠 3g 蒸馏水 1000 ml pH7。4 制法：
（1）葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装有一个倒置小管的小试管内，高压灭菌121℃15min。
（2）其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100ml,高压灭菌121℃15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将糖溶液5ml加入100ml培养基内以无菌操作分装小试管。
试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36±1℃培养，一观观察2-3天，迟缓反应应需观察14-30天。
附注：蔗粮不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。 2、ONPG增减基 成分：
邻基粉β-D-半乳糖苷（ONPG） 60mg （O-Nitropheny1-β-D-galactopyranoside） 0．01%MpH7.5磷酸钠缓冲液 10ml 1%蛋白胨（pH7.5） 30ml
制法：将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以滤过法除菌，分装10×75mm试管，每管0.5ml，用橡皮塞塞紧。
试验方法：自琼脂斜面上挑取培养物，满环接种，于36±1℃培养1-3h和24h观察结果。如有β-半乳糖苷酶产生则于1-3h变黄色，如无此酶则24h不变色。
3、缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）
成分：磷酸氢二钾 5g 葡萄糖 5g 多胨 7g 蒸馏水 1000ml 制法：溶化后校正pH，分装试管每管1ml,高压灭菌121℃15min。
甲基红（MR）试验：自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，放36±1℃培养2-5天，哈夫尼亚菌则应在22-25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性。甲基红试剂配法：甲基工10mg溶于30ml95%酒精中，然后加入20ml蒸馏水。
V-P试验：用琼脂培养物接种本培养基中，放36±1℃培养2-4天。哈夫尼亚菌则应在22-25℃培养。加入6%。A萘酒精溶液0.5ml和40%氢氧化钾溶液0.2ml，充分振摇试管，观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃4h再进行观察。
4、西蒙氏柠檬酸盐培养基 成分：
氯化钠 5G柠檬酸钠 5g 硫酸镁（MgS04 7H20） 0.2g琼脂 20g 磷酸二氢铵 1g蒸馏水 1000ml 磷酸氢二钾 1g0.2%溴麝香草本分蓝溶液 40ml pH6.8
制法：先将盐类溶解于内，校正pH再加琼脂，加热溶化然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，高压灭菌121℃15min，放成斜面。
试验方法：挑取少量琼脂增物接种，于36±1℃培养4天，每天观察结果。阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。
5、丙二酸钠培养基 成分：
酵母浸膏 1g 氯化钠 2 g 磷酸氢二钾 0.6g 0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12ml 磷酸二氢钾 0.4g 蒸馏水 1000ml pH6.8
制法：先将酵母浸膏和盐类溶解于水,分装每瓶100ml 分别加入各种氨基酸。赖氨酸和鸟氨酸按0.5%加入，dl-氨基酸按1%加入。再行校正pH至6.8。对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小式管内管每0.5ml，上面滴加一层液体石蜡，高压灭菌115℃10min。
试验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36±℃18-24h，观察结果。氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。阴性者
无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使增基变为黄色。对照管应为黄色。
9、蛋白胨水（靛基质试验用） 成分：
蛋白胨（或胰蛋白胨） 20g 蒸馏水 1000ml 氯化钠 5g pH7.4
制法：按上述成分配制，分装小试管，高温灭菌121℃±15min。 靛基质试剂：
（1）柯凡克试剂 将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75ml戊醇中然后缓慢加入浓盐酸25ml。
（2）殴-波试剂 将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95%酒精95ml，然后缓慢加入浓盐酸25ml。
试验方法：挑取小量培养物接种，在36±1℃培养1-2天，必要时可培养4-5天。加入柯凡克试剂0.5ml，轻摇试管，阳性者于试剂层呈红色。或加入殴-波试剂约0.5ml，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
附注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌咱鉴定后方可使用。
10、尿素琼脂 成分：
蛋白胨 1g 0.4%本分红溶液 3ml 氯化钠 5g 琼脂 20g 葡萄糖 1g 蒸馏水 1000ml 磷酸二氢钾 2g 20%尿素溶液（后加）100ml pH7.2±0.1
制法： 先将尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶，高压灭菌121℃±15min。冷至50-55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液，尿素的最终浓度为2%，最后pH应为7.2±0.1。分装于灭菌试管内，放成斜面备用。
试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。