FACSAria流式细胞仪上样准备

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FACSAriaⅡ流式细胞仪上样准备

(一)上样时需要准备的物品

? 漂白水3-5L ? 75%酒精5L

? 无菌PBS或生理盐水5-10L (二)FACSAriaⅡ 分选时需自备的质控品

? Accudrop beads(分选时液滴延迟校准):货号345249,货期需4周,

如需分选要提前订购。

注:做分选时需自备,如无自备亦可上样,但不保证分选效果。 (三)上样时,样品的准备

? 保证细胞活性:需4℃冰上保存

? 保证样品为单个细胞,不黏连:反复吹打,用尼龙膜过滤 ? 分选时,需再次培养的,收集管内需装至少1/2培养基。

建立实验模板

1.在软件界面左侧Browser面板下,依次点击New Folder、Experiment、Specimen(均可重命名),单击Specimen左侧“+”符号,显示下方的Tube,点击左侧灰色指示箭头,使之变成绿色。

2. 在软件Cytometer面板上,点击Parameters选项卡,选择实验所需荧光通道(按Ctrl键可多选),并删除多余通道。选择荧光素名称、信号放大类型(log/lin)、信号脉冲类型(H/A/W),

3. 在右侧worksheet页面中,画出实验所需模板:选择点图(双参数)或直方图(单参数),在图中选择参数,并建立所需“门”(多边形、矩形、十字象限形、线形,根据实验情况而定)。利用鼠标右键Show Populations选项建立图之间的联系。

4.至此,一个简单的实验模板基本建成。现在可以将样本管放在上样台上,点击上样面板的load,此时Acquire Data自动被激活或手动点击采集控制面板上的Acqire data按钮,仪器开始获取样本数据。

5.调整Cytometer面板中各通道电压,使FSC/SSC中信号位于利于观察的位置。调整阈值(Threshold),去除碎片和噪音信号。调整上样速度(Flow Rate)。


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